Coloration: Acridine rouge, Acriflavine et bleu Astra

[Maraussan]

=> Déplacé de http://www.lenaturaliste.net/forum/view ... 183&t=2122


Et une recette de Carmin aluné de Grenacher tirée du Précis de Microscopie de Langeron (1921):
C'est celle que j'utilisais...
Sans alcool bien sur, ET en 2 bains séparés.
J'avais pas pensé à regardé le Langeron, plutot orienté histo animale.

ps Alain: Je serais intéressé de voir une image de tes anciennes lames montées au baume.
Photos bientot, je remets en service un oculaire numérique.
J'ai pris 5 minutes pour regarder un peu mieux le stock de lames (presque 40 ans...); bilan:
- les lames montées à l'Eukitt semblent bien mieux conservées
- les lames montées au Baume sont globalement un peu passées, très pastellisées.
Exceptionellement, soit le carmin a en parti disparu, soit le vert a en parti disparu.
J'avoue qu'il arrivait que le protocole ne soit pas respecté à la lettre, pas de pendule murale, pas de troteuse à nos montres, pas de chronos Oméga ...

On est loin, je confesse, des résultats que des protocoles actuels permettent d'envisager :
différenciation en 3 bains (Acridine Red, Acriflavine et Astra Blue), réactif mis au point par Robin Wacker.
Note: découvert sous le web, jamais pratiqué, Wacker inconnu, Klaus semble connaitre, à toi le relai !!

Acridinrot, Acriflavin und Astrablau (2).jpg (157.48 Kio) Vu 5475 fois

Photo de Rolf-Dieter Müller
Un protocole très détaillé fut publié en langue allemande...

[Maraussan]

stained with Acridine Red, Acriflavine and Astra Blue, from Robin Wacker

Klaus bonsoir, je crois que tu connais bien, non ?
Peux-tu nous donner plus de précisions sur le réactif ???
merci

[Klaus]

Bonsoir Alain, tous,

je viens d´avoir écrit une longue article, en passant j´ai cherché le lien:
http://www.mikroskopie-forum.de/read.php?2,51090
revenue au "naturaliste" et tout perdu
encore une fois mais plus bref

Je connais tous les deux Robin et Rolf-Dieter. J´ai vu Robin samedi passé à l´université de Würzburg.
Il-y-a un meeting des microscopistes 2fois par an.
La colo W3 de Robin était un secret plus que 20 ans je pense. Mais il a fait un artricle dans le Microkosmos 4/2006
Le protocole est difficile il demande TEP (Triethylphosphat) pour la déseccage avant l´isopropanole, parce que des traces de l´eau vont extracter l´acridine-rouge.

Rolf-Dieter a fait des essays d´éleminer le TEP (très cher!) avec des bons résultats.

Rolf-Dieter m´a dit qu´il préfère mon Etzold-vert, parce que l´usage est plus simple et les résultats sont aussi bon (mais pas si spectaculaire que Robins W3) Il a acheté 250 ml!

Dans le lien il-y-a un autre lien où R-D donne les détails (André pourrait traduire? )

les colos

Acridine Red, Acriflavine and Astra Blue

sont de Chroma . Mais je pense, ce n´est pas possible d´acheter l´acriflavine. Il-y-a des réstrictions. Si quelqun est interessé on peut s´adresser à moi!

Ouff le Français

[Maraussan]

Le protocole publié est le suivant :
W-3A-Färbung nach Wacker (Acridinrot-Acriflavin-Astrablau)

Benötigte Chemikalien :
Acridinrot 3B (C.I. 45000),
Acriflavin (C.I. 46000),
Astrablau FM (C.I. 48048),
Ethanol 50%ig,
Eisessig,
Triethylphosphat (TEP),
Xylol

Bemerkung :
Nach Mitteilung von Herrn Dr. Horst Wörmann und mit freundlicher Genehmigung von Herrn Robin J.G. Wacker

Arbeitsablauf :
1- Schnitte in Xylol entparaffinieren (dann Alkoholreihe bis zum 50%igen Ethanol)
2- Acridinrotlösung 5 - 15 Min.
3- Auswaschen mit Aqua dest. 15 Sek.
4- Acriflavinlösung 5 - 15 Sek.
5- Auswaschen mit Aqua dest. 15 Sek.
6- Astrablaulösung 30 Sek. - 3 Min.
7- Auswaschen mit Aqua dest. bis keine Farbstoffreste auf dem Objektträger verbleiben.
8- Auf dem Objektträger haftende Wassertropfen abschütteln.
9- Dehydrieren mit 3 Portionen Triethylphosphat (TEP) je 5 Sek.
10- Aufhellen mit Xylol (2-3 Portionen) Mikroskopische Kontrolle.
11- Falls die Färbung nicht zufriedenstellend gelungen ist -> das Xylol mittels Ethanolreihe (bis 50%ig) entfernen. NACHFÄRBEN siehe Anmerkung.
12- Einschluß in nicht fluoreszierendes synthetisches Eindeckmittel (z.b. Malinol, Eukitt, Entellan)

Ergebnis :
Zellwände blaugrün bis grün, verholzte Zellwände leuchtend rot. Zellwände der äußeren Hypodermis orangerot
Zellwände der innenliegenden Hypodermis tiefrot, Suberin und Cutin hellrosa, Zellkerne tiefrot

Anmerkung :
Ist die Rotfärbung zu schwach ausgefallen, muss die Färbezeit mit Acriflavin verkürzt oder bei Nachfärbung die Einwirkzeit von Acridinrot verlängert werden.
Ist die Blau-Grün-Färbung zu schwach ausgefallen, die Färbezeit mit Astrablau verlängern.

Brilliantere Färbungen resultieren, wenn man die Astrablaulösung vor der Färbung mit einer kleinen Menge Acriflavinlösung versetzt.

Ansätze :
- Astrablaulösung: 2g Astrablau werden in 100ml Aqua dest. gelöst und mit 2ml Eisessig versetzt.
- Acridinrotlösung: 1g Acridinrot 3B werden in 100ml 50%igem Ethanol gelöst und mit 2ml Eisessig versetzt. Alternativ kann auch eine 1%ige wässrige Lösung von Acridinrot verwendet werden. Besser ist jedoch der angesäuerte alkoholische Ansatz.
- Acriflavinlösung: 1g Acriflavin werden in 100ml Aqua dest gelöst und mit 2ml Eisessig versetzt.

Je veux bien comprendre que l'Etzold soit plus simple...

[Klaus]

Bonsoir Alain, tous,

Je veux bien comprendre que l'Etzold soit plus simple...

Mois je sais, parce que j´ai fait l´Etzold en toutes les variantes environs 500 coupes. Et Robins W3 plusieures fois.

Si on est interessé: à tester!