Coloration histo végétale: gros problème! (Carmino-Vert)

[Yvan]

Un coloration double intéressant et simple pour les tissues végétale est celui utilisant l'éosine Y acide libre et le bleu de méthylène base libre, les deux dissous dans le xylène.

Coloration est imediate, la différenciation pas nécessaire.
Déshydratation complète des coupes, xylène, xylène bleu, xylène, xylène rouge, rince dans xylène, baume de Canada, prêt.

L'éosine Y acide libre est disponible, le bleu de méthylène base libre doit être préparée, mais ce n'est pas si difficile, voir "Peacocks Elementary Microtechnique".

[Maraussan]

Double coloration (les couleurs sont décalées chromatiquement, elles commencent à fadir), datant très exactement du 1er trimestre 1972. Montage Eukitt. Les montages au Baume sont similaires.
Photo de base brute, mal exposée, non retouchée ni recadrée (mais réduite à 800 pixels).

1-800.jpg (192.07 Kio) Vu 6867 fois

[Marcel]

Juste un petit mot sur ce sujet, en passant, et surtout pour trouver l'occasion de saluer Klaus et Christian !
Klaus, lors du séminaire de microscopie (où participait mon excellent ami Guy Auderset), nous avons longuemet utilisé et testé ton protocole : coloration Etzold Grün - fixation isopropanol - montage Euparal, avec beaucoup de succès et des résultats excellents.
En parallèle, nous avons réalisé nombre de coupes colorées au CV de Mirande, et montées dans Aquatex, un nouveau produit disttribué par VWR International qui polymérise très vite, mais DONT LE SOLVANT EST l'EAU ... ce qui élimine les problèmes de régression de coloration causés par l'alcool ou le xylol. Pour l'instant, aucune disparition des couleurs .... je vérifie dans un mois !
Pour info, le rouge de ruthénium a été sorti du catalogue des MLB, car il coûte une fortune par gramme, et j'ai surtout appris qu'il est totalement instable et doit être préparé exemporanément pour utlisation immédiate.
amitiés à tous ceux que je connais.
M
PS : pour info, un membre du conseil d'administration de l'AMFB a décidé de prendre en charge l'organisation et la logistique d'un prochain congrès de microscopie en mars 2014, où j'agirai simplement commme intervenant ..... si Dieu me prête vie et santé jusque là, car les années s'accumulent !

[Fredlab]

Hello

Un petit up à ce topic...
Après une grosse vingtaine années de quiescence, je replonge dans les coupes végétales, les colorations... le Carmino-Vert de Mirande.
J'ai posté quelques questions à propos des supports utilisables pour aider la coupe. Pour celle qui suit, j'ai fait à la main, avec une demi-lame de rasoir et du styrodur... difficile d'avoir une coupe entière et suffisamment fine.
Le sujet, un genre de Brassicacée que l'on trouve en ce moment dans des champs plus ou moins en friche.



C'est un morceau de pano fait au 10x - une version plus complète, réduite à 5500 pixels de large (d'origine, pour du zoomify, il fait 22000 pixels de large) - ICI

Comme ça fait des années que je n'ai pas mis le nez sur ce genre de coupe, j'ai une ou deux questions.

1 - les couleurs vous paraissent-elles correctes ? (carmino-vert en une seule solution, achetée chez Begenat)
2 - j'ai des précipités foncés qui viennent se nicher dans les coupes (en plus de quelques bulles), en connaissez-vous l'origine ? un problème avec le colorant et les coupes que je ne rince pas entre l'eau acétique et le bain de carmino-vert ?
3 - les cellules vous paraissent-elles assez vidées ? (javel du commerce - à 2,6% de chlore actif - bain d'une quinzaine de minutes)

Merci pour vos réponses/aides éventuelles.

[Klaus]

Bonjour Fréderic,
le Carmino-Vert de Mirande est toujours un peu faible en rouge - ça veut dire c´est normal!

Si les précipités ne se trouvent dans la coupe avant la coloration tu peux essayer de faire une filtration des solutions.

Après le bain de javel du commerce il faut rincer avec de l´eau plusieurs fois pour éléminer tous les traces de la chlore activ.

Dit à côté: pour une coupe à main avec une demi-lame de rasoir c´est vraiment bon.

Après une grosse vingtaine années de quiescence

Tu as fait les dernières coupes à l´age de 5?

quiescence

je n´ai pas trouvé ce mot en dictionnaire?

[Fredlab]

Hello

Merci Klaus pour tes remarques constructives.
Pour les prochains essais, promis, je rince* mieux mes coupes.

Après une grosse vingtaine années de quiescence

Tu as fait les dernières coupes à l´age de 5?

quiescence

je n´ai pas trouvé ce mot en dictionnaire?

Disons que ça fait un peu plus de 20 ans que je ne suis plus étudiant.
Quiescence = repos = inactivité
Ca fait un peu plus de 20 ans que je n'ai pas eu le loisir de faire de vraies coupes.
(juste quelques démonstrations avec les élèves)

* A ce propos, je viens de retrouver un ustensile très utile


(il trainait dans mes affaires de concours)

Avec ça, les transferts d'un bain à un autre sont facilités et surtout, les rinçages sont très efficaces puisque je me souviens que j'y allais à grand coup de jets de pissette.