Préparation du pollen (et gélatine glycérinée)

[hermo-sage]

Bonjour,

un grand merci à André.je trouve son sujet sur la préparation du pollen super intéressant et j'en profite vraiment!
je voudrais avoir plus d'éclaircissements quant aux points suivants:
-est ce possible d'utiliser d'alcool chirurgical (alcool à 70°) au lieu de l'alcool à 90°? y aura t-il un impact sur la qualité de l'image obtenue?
-comment et dans quelles conditions je peux prépare la gélatine glycérinée colorée sachant que je me dispose de la glycérine et des plaques de gélatine( comment la faire fondre?).
-comment je procède à l'essuyage des auréoles?

je vous remercie d'avance.

[Maraussan]

-est ce possible d'utiliser d'alcool chirurgical (alcool à 70°) au lieu de l'alcool à 90°? y aura t-il un impact sur la qualité de l'image obtenue?
Comme toujours, si l'alcool éthylique à 90% était recommandé, c'est pour son aptitude supérieure à séparer le film gras. Les quantités consommées sont minimes, on utilise l'alcool au compte-goutte. Inutile par-contre d'utiliser de l'alcool à 90% non dénaturé, sur lequel une très forte taxe fiscale est appliquée.

-comment et dans quelles conditions je peux prépare la glycérine gélatinée colorée sachant que je me dispose de la glycérine et des plaques de gélatine (comment la faire fondre?).
La gélatine est mise à tremper durant qq heures, puis la solution est portée tiède. Ne jamais dépasser 60°C.
- eau bidistillée (au pire, Mont Roucou) 40gr
- gélatine alimentaire 8gr
- après fusion, ajouter 52 gr de glycérine officinale (non acidifiée)
Mélanger doucement, progressivement, en évitant de faire des millions de bulles ...
Se pose la question du conservateur bactéricide et fongicide, obligatoire (oui oui, tant la gélatine que le glycérol peuvent être dévorés!). Le phénol à la dose de 0.5% sous nos climats (*) est le meilleur, mais bouffe les teintes à la longue. Le thymol est utilisable à 1%, à défaut de Preventol. Le benzoate de sodium est inefficace à ce pH. Tous ces conservateurs sont toxiques, irritants, dangereux pour l'environnement (sinon, ils ne seraient pas efficaces). Le truc consistant à ajouter qq gouttes de bain de bouche est totalement inefficace.
Le colorant, et sa dose, dépendent de la prédilution de celui-ci. Traditionnellement, Fuschine BASIQUE (pas la version Acide...)

-comment je procède à l'essuyage des auréoles?
On demande à l'Assistant Préparateur de faire le boulot... plus sérieusement, papier absorbant non peluchant (Kleenex). Le plus simple étant d'attendre 48h le refroidissement de la préparation, et de nettoyer les surplus à la brosse à dent et au savon ...

(*) 1% en pays chauds, exceptionnellement 2% dans pays tropicaux (la préparation est immergée 2m dans l'alun de chrome).

[hermo-sage]

excellent merci d'être si rapide Alain.
en tant que débutant, il est tout à fait normal de poser des questions en tout genre, même parfois bettes (je reconnais)
par quoi puis-je remplacer l'eau bidistillée? à quelle étape j'ajoute la fuchsine? penses-tu qu'un bain marie fera l'affaire pour fondre la gélatine?

bien cordialement

[Maraussan]

quoi puis-je remplacer l'eau bidistillée?
Une eau minérale TRES PEU MINERALISEE, donc : Mont Roucou en premier, Volvic en deuxième. L'eau décalcérisée (ou échangée, type fer à repasser) à éviter.

à quelle étape j'ajoute la fuchsine?
en dernier, comme le donne toujours l'ORDRE des recettes.

penses-tu qu'un bain marie fera l'affaire pour fondre la gélatine
Oui, je ne connais d'ailleurs pas d'autre moyen.
Tiède, pas bouillant, OK ?

Coloration : on peut colorer léger pour un examen immédiat. On surcolore en général pour l'archivage, à moins d'examiner plustard en contraste interférentiel différentiel.

[hermo-sage]

question étrange, entre l'acétolyse et le dégraissage à l'alcool, quelle est la plus facile pour un novice?

[Christian]

Bonjour à tous,

Juste quelques précisions : Stériliser les contenants avant d'y conserver la glycérine gélatinée ! (comme pour les confitures ... et utiliser des petits flacons, genre 30 ml)
Toujours utiliser du matériel parfaitement propre pour prélever dans le pot.
J'ai un petit flacon sans aucun conservateur qui date d'environ 8 ans, pas une seule moisissure visible ! En revanche la GG a un peu jauni, mais c'est normal car le flacon est transparent et à la lumière (à éviter).
Les préparations qui datent des même années n'ont pas été attaquées non plus. Si on les lute (conseillé) on met plus de chance de son côté.

Pour enlever le surplus de GG (le débordant) j'attends que ça prenne puis je l'ôte avec un cure-dent, à sec. On peut ensuite luter directement. (vernis à ongle ou peinture acrylique un peu épaisse)
Attention aussi avec les GG colorées, il faut parfois un peu adapter les proportion d'eau car elles peuvent devenir trop liquide et mal se figer.

[Maraussan]

La question de la conservation des préparations montées en GG (Gélaline glycérinée) est un serpent de mer depuis 1880...
J'ai deux lots conservés depuis 1971, des algues vertes rares fixées au lactophénol cuprique (pas de pollen, ce n'était pas ma tasse de thé en ce temps).
Le premier est un lot monté à la GG phéniquée à 1%. Il est absolument neuf, aucune trace de corruption. Le contenant brut de GG (doublement obturé) est toujours utilisable.
Le deuxième lot monté à la GG non phéniquée est corrompu par des moisissures, et la gélatine liquide, lysée. Les spécimens sont dégradés.

Les 2 lots furent archivés dans la même boite, à l'abri des UV et autres interractions.

[KATZEN]

Bonjour à tous,

Merci de tous vos conseils sur la préparation des pollens et leur coloration.A propos de la conservation des préparations - idée bête ! - est-ce qu'un passage des lames sous une lampe à UV peut les stériliser et éviter le développement de moisissures ?

Merci de vos idées.

A+

[Maraussan]

est-ce qu'un passage des lames sous une lampe à UV peut les stériliser et éviter le développement de moisissures ?

Bonne question !
J'ai pas mal fait joujou avec les lampes UV (germicides ou autres).
Mon sentiment, à l'issu des tests (*) : les UV cassent tout, avec une extrème violence. Les colorations, les proteines, les graisses, en fait tous les constituants organiques. C'est visible parfois immédiatement, parfois ultérieurement. Reste que des spores (bactériens ou fongiques) peuvent s'en tirer, ce que certains tests montrent.
Deuxio, la décontamination du milieu ne protège pas d'une surinfection ultérieure. Les petites bébètes ne sont pas pressées, elles ont des décénies devant elles. Les phénols ou thymols, molécules présentes naturellement à faible concentration dans le milieu vivant, sont (utilisées à bon escient) utiles.

(*) sans prétention quant à une quelconque exhaustivité ...

[KATZEN]

Merci de ta réponse rapide Alain ,je me doutait que les UV et colorants ne devaient pas faire bon ménage !

Le phénol est très toxique,sûrement très contingenté parmi les produits chimiques - comment s'en procurer ? as-tu un filon ? ?

Est-ce que le Roti®-Phénol pour extraction des acides nucléiques de chez ROTH convient ? mais en 100 ml ça fait beaucoup...à 22.05€ et - 39.10 € les 250 g chez Grosseron s'il en faut qq g .

Merci d'avance de ton avis.