Bonjour,
J'étudie les modifications qu'induit un puceron au niveau des tissus du bois de peuplier notamment au niveau du parenchyme cortical car il semble que celui-ci induit une nécrose à ce niveau.
Nous avons donc après fixation, réalisé des inclusions dans une résine (Techno-Vit) de nos échantillons et des coupes (5µm) à l'aide d'un microtome.
J'ai déjà réalisé des colorations au Richardson (bleu de méthylène 1% dans du borax et azur II) et au phloroglucinol-HCl (coloration rouge de la lignine).
La coloration au phloroglucinol n'est que temporaire et j'aurais aimé faire une coloration au Carmino-Vert.
J'ai eu beau utiliser vos conseils je n'obtient aucune coloration.
Est-ce que cette coloration se fait que sur du matériel frais? Je pense également que ma résine est peut-être hydrophobe et qu'elle ne permet pas cette coloration?
Avez-vous une idée pour moi ?
Merci d'avance.
Cordialement
Elodie
Coloration en historésine
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Re: Coloration en historésine
Bonjour,
primo, toute contamination par l'hypochlorite résiduelle réduit à quasi néant la probabilité de réussite.
EN DEUX BAINS:
protocole de la double coloration différentielle "Carmin aluné - Vert d'iode"
- nettoyer les tissus à l'hypochlorite de sodium, 2 bains, puis quelques secondes dans une solution de soude à 5% (potasse)
- double rinçage à l'eau distillée
- tanponer quelques minutes dans un bain d'eau acétifiée à 1% (neutralisation du chlore et de la base)
- première coloration différentielle au Vert d'iode durant 2 à 3 minutes (ou au Bleu phéniqué)
- rincer rapidement à l'eau distillée
- deuxième coloration différentielle au Carmin de Grenacher durant 10 à 15 minutes
- rincer rapidement à l'eau distillée
- montage dans la gélatine glycérinée (ou pva...)
Carmin aluné de Grenacher: carmin 1g, alun de potassium 5g, eau distillée 100ml, filtrer, puis acide phénique 0.5g
Vert d'iode à 1%: vert 1g, alcool à 60° 20ml, eau distillée pour faire 100ml
C'est un protocole en béton, simplissime...
En es-tu déjà là ??
primo, toute contamination par l'hypochlorite résiduelle réduit à quasi néant la probabilité de réussite.
EN DEUX BAINS:
protocole de la double coloration différentielle "Carmin aluné - Vert d'iode"
- nettoyer les tissus à l'hypochlorite de sodium, 2 bains, puis quelques secondes dans une solution de soude à 5% (potasse)
- double rinçage à l'eau distillée
- tanponer quelques minutes dans un bain d'eau acétifiée à 1% (neutralisation du chlore et de la base)
- première coloration différentielle au Vert d'iode durant 2 à 3 minutes (ou au Bleu phéniqué)
- rincer rapidement à l'eau distillée
- deuxième coloration différentielle au Carmin de Grenacher durant 10 à 15 minutes
- rincer rapidement à l'eau distillée
- montage dans la gélatine glycérinée (ou pva...)
Carmin aluné de Grenacher: carmin 1g, alun de potassium 5g, eau distillée 100ml, filtrer, puis acide phénique 0.5g
Vert d'iode à 1%: vert 1g, alcool à 60° 20ml, eau distillée pour faire 100ml
C'est un protocole en béton, simplissime...
En es-tu déjà là ??