Bonsoir, je cherche de l'aide: en confectionnant des coupes végétales je rencontre systématiquement un problème: mes coupes se décolorent lorsque je les repasse dans la série des alcools avant le toluène. Ce constat est valable pour le carmin aluné, la safranine; le vert d'iode résiste. Que faire, où est l'erreur? Ose-t-on laisser la coupe colorée sécher et l'inclure directement (j'utilise l'eukitt)?
Merci pour vos propositions.
Pierre
La safranine se dissout trés facilement dans les alcools, speciallement dans l'alcool éthylique dillue (50%, 70%). La déshydratation doit se faire si vite que possible et dans les alcools éthylique de haute concentration ou dans l'alcool isopropylique de haute concentration.
En general: les colorants basique se dissout mieux dans l'alcool méthylique que dans l'alcool étylique que dans l'alcool isopropylique.
Un solution c'est de laisser sècher les coupes quelques secondes sur un tissue suivi d'un déshydratation dans l'alcool isopropylique pur. C'est la methode que j'utilise, voir ci dessous (coloration safranine-blue astra).
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Un autre solution c'est d'obtenir un coloration plus intense avec la safranine en utilisant un mordant.
Malheureusement ces mordants (acide phénique, acide chromique, aniline) sont dificille a obtenir, mais il-y-a un qu'on peut obtenir: le bichlorure de zinc en solution aqueux a 2%.
La plupart des colorations avec le carmin doivent etre fixer avec un acide: le carmin se dissout facillement dans les solutions basiques.
Ces doubles colorations simultane aparaissent tous simple, mais en realite c'est souvent tres dificille d'obtenir des bonnes resultats. C'est la même chose avec quelques de ces colorations en histologie animale: le Van Gieson (acide picrique-fuchsine acide) et le bleu d'aniline-orange G de Mallory. La solution est simple: coloration successive...
et pour moi un "réçu" stp!
