Fluorescence avec le Zeiss IIIRS et... une frontale à Led

[Florent]

Bonsoir à tous,

Après plusieurs tentatives d'approche infructueuses de la fluorescence avec le système "IIIRS" de Zeiss (une sorte de grosse armoire à tourelle, avec blocs filtres et éclairage épiscopique) je viens enfin d'obtenir des résultats encourageants en utilisant... une frontale à Leds (je me refuse a utiliser des lampes à vapeur de mercure. trop peu commode et dangereux).

La frontale ("Led Lenser", trouvée chez Décathlon) s'adapte quasi-parfaitement au port d'ordinaire réservé au bloc d'éclairage halogène, en utilisant le bandeau élastique pour maintenir la lampe sans autre accessoire (il y a quand même encore des progrès à faire en matière de centrage).
Mais autre avantage, elle est munie d'un potentiomètre pour régler l'intensité lumineuse.

SANY0104.JPG (100.21 Kio) Vu 6745 fois

SANY0107.JPG (77.18 Kio) Vu 6748 fois

Pour la photo, je suis toujours contraint d'utiliser un système bancal, dans tous les sens du terme, a base d'adaptateur Mikas de Leitz.

SANY0108.JPG (81.07 Kio) Vu 6744 fois

Le D80 est utilisé à 15s et 800 à 1000 ISO
Objectif utilisé : Leitz Fl oel 54x 0.95.
L'immersion a été faite dans l'eau (je n'ai plus d'huile).

DSC_7191.JPG (167.03 Kio) Vu 6745 fois

Algues issues d'une culture de Haematococcus sp.
Vue en diascopie (ci-dessus)

[Florent]

Hop, je me suis laissé surprendre par la limite de fichiers joints par message...

Reprenons ceci est l'équivalent de la première vue en fluo :

DSC_7182.JPG (100.72 Kio) Vu 6763 fois

Et enfin, une autre vue en diascopie et en fluo, nettement plus informative :

DSC_7201.JPG (127.94 Kio) Vu 6760 fois

[André]

Bonjour Florent

je suis très surpris par ces excellents résultats : mais ne comprend pas comment tu as obtenu ce résultat : les leds emettent elles encore autant d'UV , ces résultats me semblent analogues aux essais que j'ai pu faire avec une lampe à mercure!

[PierreH]

Il n'y a pas besoin d'UV pour obtenir cela : l'autofluorescence de la chlorophylle est obtenue par une lumière bleu, ce que donne la combinaison de filtres FITC

[André]

le résultat serait le même avec l'utilisation d'une led bleue sans filtres FITC?

[PierreH]

le résultat serait le même avec l'utilisation d'une led bleue sans filtres FITC?

Oui : choisir une LED bleu royal.
Mais un des filtres de la combinaison FITC bloque la remontée de lumière bleu vers les oculaires.
Sans lui, il y a de fortes chances que l'image soit baignée de bleu !

[Florent]

Diantre ! Donc je ne suis pas plus avancé...

Les zones vertes m'intriguent, il semble qu'elles proviennent de kystes morts d'Haematococcus, qui apparaissent incolores à l'image.

Une autre question : existe-t-il des solutions a peu près efficaces à base de Led pour la fluorescence ?

[Daniel]

Bonsoir,
j'ai utilisé quelque temps ce microscope Zeiss et sa fluo IIIRS. (avant de le revendre quand j'ai trouvé une fluo Olympus)
Mème avec une lampe d'occasion usagée. Je n'ai pas eu de problème.
Les explosions doivent être très rares. Comme pour l'halogène, je vois peu la nécessité de remplacer un éclairage fonctionnel par un bricolage. Les précautions pour les yeux seront les mèmes avec un éclairage à led qu'avec une lampe à vapeur de mercure.
Ce serait différent pour quelqu'un qui n'aurait pas de système d'illumination dédié ou s'il y avait une raison précise.
Par exemple les led n'ont pas besoin de fonctionner un temps minimum et peuvent servir instantanément à la différence des lampes à vapeur de mercure.

Il est bien sur possible de faire de la fluo avec un éclairage à led. Certaines led vont mème fournir directement les longueurs d'onde excitatrices.
Il existe des sites d'amateurs sur ce sujet (par exemple dans miscape: http://www.microscopy-uk.org.uk/mag/art ... luoro.html ; autre ref à rechercher) . Certains ont mème fait de la fluo en éclairant simplement par dessus les préparations avec une led.
Il faut rappeler qu'il est nécessaire de toujours filtrer pour l'observation ou observer via l'image d'un capteur numérique.

C'est vrai que les leds vont fournir aux amateurs des sources de grande longueur d'onde (bleu, violet , ultraviolet) bien moins encombrantes que les lampes à vapeur de mercure.
Un autre avantage est qu'il ne sera plus nécessaire de filtrer à l'excitation avec des éclairages de leds quasi monochromatiques.
voir cet article pour du matériel Zeiss
http://www.microscopy-analysis.com/feat ... microscopy

Cordialement

[Florent]

Merci Daniel,

Je me limite pour l'instant au "proche UV" par crainte, justement, ne maitrisant pas encore parfaitement le IIIRS, je n'ai pas encore trop confiance en lui !
Ton expérience m'intéresse !

[PierreH]

Tout comme Daniel, j'ai utilisé à titre personnel un système d'épifluo à lampe à mercure sur mes Zeiss Standard : aucun problème.
Mais j'ai tout de même remplacé la boite à lumière par un modèle avec lampe halogène plus simple à utiliser pour un particulier (prix, disponibilité, pas de risque lié au mercure)

A titre professionnel, je n'ai jamais entendu parler d'une telle explosion.
Mais, les professionnels changent (en fait c'est le SAV attitré qui le fait) ces ampoules à arc préventivement au bout d'un certain temps de fonctionnement (la lampe reste souvent allumée du matin au soir ou plusieurs heures par jour).

Je confirme aussi le besoin de filtrer les UV en provenance de la LED si celle-ci en émet.