Coupe histologique végétal

[Vincent]

Bonjour,

Je connait bien l'histologie animal, mais pas du tout l'histologie végétal. Je me suis donc lancé dans la coloration de plante (Tige, feuille,, racine etc...), apres fixation, inclusion en paraffine, et en utilisant le carmin aluné et le vert d'iode. Je viens de me rendre compte enfin je pense que l'aipaisseur de mes coupe (3 à 4 µm) sont trop faible pour avoir une coloration bien tapée.

J'aurai donc aimé savoir à combien vous coupez vos prélèvements de végétaux, et puis peut être des conseilles sur mon protocole de coloration ci dessous :

Fabrication du vert d'iode : 1g dans 100mL, bien mélanger avec un aimant, puis filtrer.

Fabrication du carmin aluné : 5g de carmin aluné dans 100mL d'eau, bien mélanger avec un aimant, porter à ébulition, laiser refroidir et filtrer.

• Protocole :
• Xylène : 10 min
• Xylène : 1 min
• Alcool 100° : 1 min
• Alcool 95° : 1 min
• Alcool 70° : 1 min
• Eau courante : 1 min
• Ac acétique 1% : 15 seconde
• Eau courante : rinçage rapide
• Vert d'iode : 15 min
• Alcool 95° : rinçage
• Eau courante : rinçage rapide
• Carmin aluné : 30 min
• Eau courante : rinçage
• Alcool 95° : 1 min
• Alcool 100° : 1 min
• Xylène : 10 à 15 minutes

Je monte ensuite ma lamelle au "Pertex" mais je ne pense pas que ça joue vraiment.

Toutes vos remarques sont les bienvenues.

Merci d'avance.

[Klaus]

Bonjour Vincent,
ce n´est pas la rubrique correcte, mais on va te "transferer"

Ton prototocole est perfecte, mais la combination vert d´iode et carmin aluné donne toujours de résultats faibles.
J´ai une alternative plus effectiv: http://www.lenaturaliste.net/forum/view ... =94&t=3830 . Là tu trouveas d´autres examples.

Si tu est interessé de la couleur tu peux me donner une PN!

[Vincent]

Re bonjour,

Effectivement, les couleurs sont beaucoup plus tapé sur vos colo, j'ai tout de même l'imprésion aussi qu'elles sont beaucoup plus épaisses, j'aimerai savoir a combien vous les coupez SVP?

Sinon "PN" c'est quoi? :p

Merci
Vincent

[Klaus]

Re bonjour,

je coupe à la main: http://www.lenaturaliste.net/forum/view ... 183&t=1119.
ça donne des coupes d´une épaisseur entre 20 et 30 µm. Pour l´histologie végetale pas mal.

Tu est invité, je ne sais pas que c´est possible d´écrire une message privé PN. Tu trouve les bouttons pour email et PN sous mon avatar à gauche!

[Vincent]

Re bonjour

Tres bien, je vais continuer mes investigations avec vos recommandations, et je vous recontacterez par "PM" :p sans doute la semaine prochaine au moins pour vous tenir au courant de mes avancées.

Bonne fin de semaine et bon week end
Vincent

[Klaus]

"PM" :p

Chez nous en Allemagne c´est PN = Persönliche Nachricht et moi je peux voir ici les expressions en allemand!


à bientôt!

[KATZEN]

Bonjour Vincent ,

Je suis très intéressé par ta technique et ton protocole d'inclusion en paraffine pour les tissus végétaux, car mes expériences se sont révélées très aléatoires et souvent irrégulières, quel est ta procédure pour arriver jusqu'à l'inclusion en paraffine, car j'ai eu beaucoup de rétractions de tissus, le prélèvement étant très cassant à la coupe au microtome Minot et s'effritant beaucoup, et par le fait inutilisable et morcelé.
voir le topic ci après:
http://www.lenaturaliste.net/forum/view ... 183&t=2780

Quant a l'épaisseur des coupes elles varient entre 12 et 20 µ environ.Je colore à l'Etzold vert de Klaus,qui donne de très bons résultats et plus contrastés qu'avec le Carmin vert d'iode traditionnel.
J'ai aussi fait des coupes au microtome de Ranvier sur tissus frais qui donnent des résultats honnêtes et plus rapides.

Merci de tes conseils . A+ sur le forum et bienvenue !

Gérard

[Christian]

Bonjour Vincent,

Pour les protocoles Carmino-vert de Mirande, voir ce sujet > http://lenaturaliste.net/forum/viewtopi ... vert#p4327
L'épaisseur de mes coupes sont du même genre que celles de Katzen et Klaus (entre 10 et 20 um)

Tu ne passes pas par une destruction du contenu cellulaire ? (eau de javelle ou Dakin ?)

[BelialL]

Salut à tous,

Je viens de faire quelques essais à l'etzold de mon côté aussi.
Ca fonctionne bien même sans passer par l'eau de javel d'après ce que je vois, je vais encore faire d'autres essais, le plus dur, c'est les coupes à la main !

Juste une petite question, quels sont les éléments qui sont colorés avec l'etzold ? Le vert d'iode colore les éléments lignifiés et le carmin la cellulose mais l'etzold c'est la même chose ?

[Klaus]

Bonsoir Kévin,

je me souviens que je t´a envoyé les deux variantes Etzold bleu et vert?

Tous les tissus lignifiées seront rouge intensiv aussi xylème et sclerenchyme. Le tissus non lignifiées seront bleu ou chez l´alternative vert.
Cuticula souvent jaune intensif par le chrysoidine.