Histologie Végétale et Inclusion en Paraffine ? (+PEG)

[Yvan]

En quelques mots l'essentiel du texte de Gerlach

Gerlach prévenit que la méthode de l'imprégnation par le PEG a des avantages mais aussi des inconvénients.

Un avantage important c'est qu'aucun déshydratation avec des alcools ou autre traitement avec des solvants de matière grasse est nécessaire, c'est pourquoi les Lipides dans les cellules maintiennent. Mais, comme l'imprégnation à la paraffine, le PEG neccesite l'effet de la chaleur, alors les rétractions des tissues ne peuvent pas toujours être évités.

Il remarque que, bien que le « Polyglycoleinbettung » apparaisse très simple, il n'est quand même pas toujours facile de gagner un bloc bien sectionable. Souvent la masse d'imprégnation devient tellement fragile qu'il soit lourd de faire de bonnes coupes. La remédie c'est de mélanger le Polyglycol avec la glycérine. Il faut ce faire compte aussi du fait que le PEG ne peut pas pénétrer dans des tissues très dense et avec peu des espaces extra-cellulaire, p. ex. beaucoup des Parenchymes.

Pour l'instant, selon Gerlach, l'imprégnation dans le PEG n'est pas encore un méthode de routine et en tout cas, si on n'a pas d'experiece avec le PEG, Il faut mis en oeuvre quelques pré échantillons avant qu'on utilise le PEG pour des grandes quantités des échantillons.


Préparation du PEG selon Krauter
Ajoute 0,5ml de glycérine a 20 g de PEG 1500 et laise fondue dans un étuve. Le mélange est hygroscopique et doit être garder dans un flacon bien ferme.


Méthode
Les objets sont préférablement fixer dans un fixative aqueux et bien laver dans l'eau. Ils sont placer dans un verre rempli d'un dilution à 20% du PEG selon Krauter. On prépare ce dilution dans un étuve en ajoutant 4 parts d'eau sur 1 part du mélange PEG-glycerine. On marque l'hauteur du liquide le verre et on divise cette hauteur en 5 parts égaux. On place le tout dans un étuve à 60°C pendant 3-4 jours. Durant ce temps l'eau s'évapore. Les objets flotter initialement, mais au fur et à mesure qu'ils sont imprègne avec le mélange de PEG-glycerine, ils baisser dans le liquide. Quand le verre ne contient qu'un cinquième du volume original, on faits les blocs. On remplit les formes faites avec un peu du papier d'aluminium avec le PEG selon Krauter non dilue, on ajoute l'objet et. Puis le tout est mis dan un endroit fraîche, préférablement dans un réfrigérateur enfin de se solidifier. Vue la nature hygroscopique du PEG, on garde les blocs dans un bocal bien ferme.

[Christian]

Bonjour Yvan,

As-tu posté une réponse aujourd'hui ?
Ce fil est resté constamment comme non lu sur mon pc donc je me posais la question ...

[Yvan]

Grrrr...
Voici un copy:

En quelques mots l'essentiel du texte de Gerlach
En quelques mots l'essentiel: Gerlach prévenit que la méthode de l'imprégnation par le PEG a des avantages mais aussi des inconvénients.

Un avantage important c'est qu'aucun déshydratation avec des alcools ou autre traitement avec des solvants de matière grasse est nécessaire, c'est pourquoi les Lipides dans les cellules maintiennent. Mais, comme l'imprégnation à la paraffine, le PEG neccesite l'effet de la chaleur, alors les rétractions des tissues ne peuvent pas toujours être évités.

Il remarque que, bien que le « Polyglycoleinbettung » apparaisse très simple, il n'est quand même pas toujours facile de gagner un bloc bien sectionable. Souvent la masse d'imprégnation devient tellement fragile qu'il soit lourd de faire de bonnes coupes. La remédie c'est de mélanger le Polyglycol avec la glycérine. Il faut ce faire compte aussi du fait que le PEG ne peut pas pénétrer dans des tissues très dense et avec peu des espaces extra-cellulaire, p. ex. beaucoup des Parenchymes.

Pour l'instant, selon Gerlach, l'imprégnation dans le PEG n'est pas encore un méthode de routine et en tout cas, si on n'a pas d'experiece avec le PEG, Il faut mis en oeuvre quelques pré échantillons avant qu'on utilise le PEG pour des grandes quantités des échantillons.


Préparation du PEG selon Krauter

Ajoute 0,5ml de glycérine a 20 g de PEG 1500 et laise fondue dans un étuve. Le mélange est hygroscopique et doit être garder dans un flacon bien ferme.


Méthode

Les objets sont préférablement fixer dans un fixative aqueux et bien laver dans l'eau. Ils sont placer dans un verre rempli d'un dilution à 20% du PEG selon Krauter. On prépare ce dilution dans un étuve en ajoutant 4 parts d'eau sur 1 part du mélange PEG-glycerine. On marque l'hauteur du liquide le verre et on divise cette hauteur en 5 parts égaux. On place le tout dans un étuve à 60°C pendant 3-4 jours. durant ce temps l'eau s'évapore. Les objets flotter initialement, mais au fur et à mesure qu'ils sont imprègne avec le mélange de PEG-glycerine, ils baisser dans le liquide. Quand le verre ne contient qu'un cinquième du volume original, on faits les blocs. On remplit les formes faites avec un peu du papier d'aluminium avec le PEG selon Krauter non dilue, on ajoute l'objet et. Puis le tout est mis dan un endroit fraîche, préférablement dans un réfrigérateur enfin de se solidifier. Vue la nature hygroscopique du PEG, on garde les blocs dans un bocal bien ferme.

[Christian]

Merci beaucoup Yvan !
(il me semblait bien que quelque chose clochait dans ce fil)

Je n'aurais pas pensé à l'ajout de glycérine !
Je ferai à l'occase des essais (au Ranvier) mais avec du PEG 4000 car je n'en ai pas d'autres …

[Yvan]

Moi aussi, la semaine prochaine. J’ai encore trouver quelques échantillons dans le AFA pour quelques petites expérimentes avec le PEG.

[Yvan]

J’ai faits quelques expériments préalable avec le seul PEG que j’ai dans mon lab, le PEG 4000 de Serva, enfin de trouver que c’est possible de couper ses blocs. J’ai utilise quelques mélanges de PEG 4000 et du glycérine (20gr + 0,25ml ; 20gr + 0,50ml ; 20gr + 0,75ml ; 20gm + 1ml).

Les blocs apparaissent tous très friable, contenant des cristaux large de PEG. C’est impossible de les couper au microtome : les coupes se pulvérisent.
J’attend un échantillon de PEG 1500, livraison probablement aujourd’hui.

La prise de vue : bloc de PEG 4000 (20 ml) + glycérine (0,5ml) à droite. A gauche un bloc de paraffine.

HPIM0280-verkleind.jpg (72.56 Kio) Vu 9143 fois

[KATZEN]

Bonjour a tous,

Je suis toujours dubitatif sur le PEG mes essais sont désolants... blocs friables, mauvaise pénétration des tissus par le PEG ,ramolissement des tiges végétales mêmes millimétriques.
Je poursuis mes recherches en paraffine qui semblent permettre , malgré des rétractions par déshydratation et durcissement des coupes plus exploitables pour l'anatomie fine - de petites structures.

La suite au prochain post !

çi joint un cliché de tige de clématite.

A+

[KATZEN]

OOps !!

Erreur du cartouche , il faut lire coloration Eltzold Vert et milieu Eukitt



A +

[Yvan]

Je poursuis mes recherches en paraffine qui semblent permettre , malgré des rétractions par déshydratation et durcissement des coupes plus exploitables pour l'anatomie fine - de petites structures.

Il reste encore la possibilité de deshydration en utilisant les autres alcools qui durcit moins les échantillons : l’alcool isopropylique, un des alcools butylique ou le 2-etoxy-ethanol (le « cellosolve », très populaire en Angleterre).

[Yvan]

From J. Brönte-Gatenby: "The microtomist's vade-mecum (Bolles-Lee), 10 ed. (1946)

Bolles-lee001.jpg

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