Re,
Si j'arrivais déjà à ton résultat, je serais content...(Après la restauration d'Ortholux, j'ai décidé de refaire des préparations ) et je trouve que ce que tu montres est déjà très satisfaisant.
Tu confirmes ce que je pressentais : Utilisation du PEG comme milieu d'inclusion avec le microtome type Minot à l'air de poser problème
A+
Alain
Matériels de microscopie : Leitz OrtholuxI, Ultropak, Condos : Heine, 402, ICT, Berek...
Olympus BX 50 "Polarisant" DIC/Nomarski
Appareils utilisés: Nikon D 3X, Olympus E-410...entre autres
Divers : Loupe BBT-Krauss,
"Je sais que je ne sais pas"...!!! SOCRATE
Pour les coupes au Ranvier, voir aussi http://www.lenaturaliste.net/forum/view ... 183&t=1119 (méthode no. 3 de Klaus - PEG)
Je pense que le PEG est surtout valable pour de très petites sections végétales ou des objets très mous (champignons par exemple).
Par ailleurs, il existe toute une déclinaison (de dureté ?) de PEG.
André et Ralph disent utiliser du 1500 avec succès, perso j'ai du 4000 et je le trouve assez dur ... (il s'effrite et ne fait pas de beaux "copeaux")
Si vous avez plus d'infos à ce sujet ?
Pour la deparaffination des coupes il faut un des produits connu: le xylène, le toluène ou un des substituts (limonènes ou iso paraffines).
L’alcool isopropylique ne dissout pas vraiment la paraffine, la paraffine fondue forme une émulsion dans l’alcool isopropylique. Pour l'inclusion à la paraffine ça marche très bien (on utilise le procède de plus en plus dans des laboratoires d’histologie et de pathologie Américaine) mais la deparaffination des coupes c’est autre chose... Pour ça il faut un (vrai) dissolvant puisant de la paraffine… Comme le xylène ou le toluène.
Moi j’utilise toujours le xylène en trois bains d’environ 150ml. 20 lames sont déparaffiné simultanément avec agitation constante dans un automate de coloration. Apres 60 lames la première bain est plus ou moins sature de paraffine. Alors la seconde devient le premier, la troisième le seconde et le troisième bain est rempli avec du xylène frais.
Alors :
Xylène : 1 min
Xylène : 1 min
Xylène : 1 min
Alcool éthylique 95% : 1 min
Alcool éthylique 70% : 1 min
Eau
Je vend le xylène « for histology » de Mallinckrodt-Baker, Labscan, Carlo Erba ou Carl Roth en bouteilles de 1l ou 2,5l et des bidons de 25l.
L’alcool éthylique et isopropylique dans un usine moins connu en bidons de 5l. Ce sont des alcools de haute qualité (l’alcool éthylique : alcool éthylique absolu : 98% + 2% MEK, eau : max. 0,1% ; l’alcool isopropylique : eau : max. 0,2%, acide : max. 20 ppm).
Paraffine : Carl Roth Rotiplast ou Paraplast en cartons de 8kg et 20kg. Pour les pièces très dense et difficile a infiltrer avec le paraffine, j’utilise un de ces paraffines et j’ajoute 0,1% de DMSO (Mallinckrodt-Baker, reagent grade).
Christian : Dieter Gerlach, « Botanische Mikrotechnik », 1984, p. 69 - 70
“… Die verhätnismässig harten Polyglycolblöcke schneidet man am besten mit einem Rotationsmikrotom oder einem kräftigen Schlittenmikrotom, dessen Messer an beiden Seiten festgeklemmt werden kann. …”.
la langue de Johann Wolfgang von Goethe m'étant inconnue, qq un aurait il la gentillesse de nous traduire ces deux pages .
Ce site est français me semble- t -il ?
flydeck56: Le “Cambridge rocker” existe en deux modèles : « The Standard » et «The Large Model ». C’est le « Standard » qu’on trouve de temps en temps sur Ebay, « Made in India ». Il faut savoir que ce microtome donne des coupes toujours un peu courbe, cela n’est pas le cas avec le « Large Model », mais je n’ai jamais vu ce dernier.
Le « Standard » est surtout un petit instrument bon marché, utilisent les rasoirs ordinaire ou les couteaux légère comme le profile A. Il est utilisable seulement pour des pièces en paraffine mou et des dimensions modeste. Sur le plupart (tous ?) de ce genre de microtome réglage de l’ inclination ou déclination est impossible.
Quelques notes sur le « Cambridge Rocker » et l’utilisation de ce type de microtome dans Carleton, H. M. & Drury, R. A. B. : « Histological Technique », Oxford University Press, 1957.
KATZEN: Très belles lames !
« …des tissus assez cassants et morcelés à la coupe… » : beaucoup des causes, peu de remèdes pour ça…
Echantillon : trop dure par nature -> microtome a glissières, pretraitement de l’échantillon (vapeur d’eau, acide hydro-fluorique…).
Fixation trop prolonge, deshydration trop prolonge, durcissement par l’alcool éthylique 90% - 95%, bains de xylène trop prolonge, bains de paraffine trop prolonge, température du paraffine trop haute (max. t° = pt. de fusion du paraffine + 2-3°C. Contrôler avec un thermomètre précise dans l’huile de paraffine), échantillon contenant encore d’eau ou moment de l’infiltration du paraffine…
« …morcelés à la coupe… » : tranchant de couteau mu, angle d’inclination trop grand, épaisseur des coupes trop grand…
Quand ce sont vraiment les échantillons qui sont trop dures on peut essayer de les sauver : couper au microtome, un cote de l’objet doit être mis a l’air. Immersion des blocs dans un liquides adoucissant. La liquide « Molliflex » (BDH) d’autrefois était excellent mais on peut aussi utiliser 100ml d’eau + 1ml d’ammoniaque du commerce + 5 - 10ml d’adoucissant concentré de lavage. Temps d’immersion : quelques heures - quelques jours.
Merci pour les infos et ta réponse concernant le microtome type Cambridge ou rocking microtome...
Je pense donc remettre en service le microtome type Minot que je possède.....lorsque j'aurais réussi à me procurer soit du xylène soit du toluène en quantité suffisante pour assurer le déparaffinage....(Je t'ai envoyé un MP à ce sujet)
A bientôt,
Alain
Matériels de microscopie : Leitz OrtholuxI, Ultropak, Condos : Heine, 402, ICT, Berek...
Olympus BX 50 "Polarisant" DIC/Nomarski
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"Je sais que je ne sais pas"...!!! SOCRATE
