Détermination du pollen

[k-rowin]

Bonjour,

Je suis actuellement étudiante dans la protection de la nature, et je mène une étude sur le pollen. Une partie de mon travail consiste à déterminer le pollen que je récolte, mais le problème est que je débute et je n'ai personne pour me dire comment faire ! J'ai lu les annonces dans le forum correspondant, malheureusement je ne dispose pas des produits indiqués. Jusqu'à maintenant, je dispose d'un microscope dont le grossissement maximal est x1000, et pour étudier le pollen (que je récolte directement sur les ruches), je place les échantillons sur une lamelle dans une goutte d'eau mélangée avec de l'éosine ; cela fait office de colorant. Pour l'instant, j'arrive à observer le pollen à peu près correctement, mais pour l'identification c'est autre chose ! Je distingue difficilement les pores ou les sillons, et je ne peux pas mesurer leur taille. Voilà donc où j'en suis actuellement.

Est-ce que certains d'entre vous connaissent des techniques qui pourraient m'aider dans la préparation des échantillons, puis dans la détermination des grains ? Cela me serait d'une grande aide, je vous remercie d'avance.

[Maraussan]

Pas si simple en effet comme matière à observer...

- frais, une eau légèrement alcoolisée mouillera mieux les grains.
- alternativement, une coloration vitale cytoplasmique au 1/10million est bien utile, mais tu dois connaitre...
- le lactophénol d'Amann (conservé à l'abri de la lumière, en flacon à paroi jaune) est certainement le meilleur milieu d'observation/fixation microscopique, très supérieur à gélatine glycérinée, mettant en évidence des détails invisibles autrement. Ce n'est pas un milieu de montage définitif par contre. Le lactophénol d'Amann s'achète en petite quantité chez un préparateur mycologue/microscopiste belge (le phénol entrant dans sa composition faisant l'objet d'une réglementation particulière depuis qq années en France).
- il te faut un oculaire micrométrique pour pouvoir mesurer les dimensions.
- des objectifs de hautes qualités peuvent être nécessaire : des neofluar/fluotar, voir des apochromatiques encore mieux corrigés, avec correction "d'épaisseur de lamelle" (terme en fait inapproprié, mais consacré par les usages...)
- de quel matériel disposes-tu pour effectuer tes observations ?
- une meilleure qualité de coloration ne peut être obtenue qu'APRES DECIRAGE complet à l'alcool à 95° de la surface du grain. La cire s'oppose en effet à la pénétration et fixation du colorant.

Fait une recherche sur "pollen" dans le Naturaliste, le sujet fut déjà traité...
Après, on en reparlera plus en détail...
André, un des co-administrateur du forum, est un grand spécialiste des préparations et détermination des pollens !!

[André]

Bonjour Rowin et bienvenue sur le Naturaliste

Comme le dit Alain, tu trouveras une description d'une technique simple sur le naturaliste voir ici:

http://www.lenaturaliste.net/forum/view ... 183&t=1192

L'université de Montpellier proposait une clé simple de détermination en ligne,mais le lien semble corrompu!

J'avais fait des essais de coloration à l'éosine,mais j'ai rapidement abandonné ce colorant pour passer au vert de méthyl ,vert d'iode et surtout à la fuchsine de Ziehl!

je te conseille aussi de fairedans un premier temps, ces manipulations sur du pollen connu afin d'étudier les structures des grains : actuellement,il y a peu de pollen à disposition,mais en plante d'appartement, on trouve les St paulia,les Schlumbergia,les jacinthes....

N'hésite pas à poser des questions si tu n'as pas trouvé toutes les solutions à tes problèmes!

[Christian]

Salut André, tous,

L'université de Montpellier proposait une clé simple de détermination en ligne,mais le lien semble corrompu!

Est-ce celle-ci ?
CLE DE DETERMINATION DES GRAINS DE POLLEN (SIMPLIFIEE)
http://pedagogie.ac-montpellier.fr/disc ... ledet.html

A voir aussi:
Les pages perso de M.Verolet qui contiennent une palynothèque d'env. 600 sp (site sans mises à jour depuis longtemps !)
http://pagesperso-orange.fr/pollens/frames.htm

Et bien sûr la galerie du forum, partie Pollens => http://www.lenaturaliste.net/forum/gale ... php#topgal

[k-rowin]

Re-bonjour à tous,

Je vous remercie de vos réponses ; j'étais effectivement déjà allée faire un tour dans la section pollen de ce forum, très intéressante d'ailleurs. C'est justement à cause du matériel que je suis embêtée : comme je vous l'ai dit, je ne dispose pas des solutions citées, d'un micromètre non plus... Pour la fuschine de ziehl, je pense bien qu'il y en a là où j'effectue mes observations, seulement le laborantin m'a dit qu'une préparation préalable était nécessaire, or je n'ai pas le temps de la faire, il me faudrait quelque chose que je puisse utiliser immédiatement (je ne dispose que d'une heure pour effectuer mes observations). Pensez-vous que je peux utiliser la fuschine telle quelle, directement sur le pollen ?
De plus, je ne dispose que d'un microscope au grossissement maximum x 1000 ; à ce grossissement-là, l'observation n'est pas aisée, l'oculaire est comme "brouillé", d'où mes difficultés à reconnaître la structure. Si j'ai bien compris, il faudrait "nettoyer" plusieurs fois l'échantillon avec de l'alcool, avant d'appliquer le colorant ?
Question plus pratique, j'ai des échantillons de pollen que les abeilles ont récolté vers la mi-décembre 2008 (eh oui, malgré le froid). Auriez-vous des pistes de plantes qui seraient susceptibles de fleurir à cette saison ? A priori, bien qu'il était encore en fleur, je n'ai pas de pissenlit ! J'ai 4 pollens différents en tout de cette période.
En tout cas, je vous remercie d'avance de votre aide !

[André]

Re Rowin

Pensez-vous que je peux utiliser la fuschine telle quelle, directement sur le pollen ?

L'idéal c'est de l'incorporer (à condition qu'elle s'y dilue...faire un essai au préalable) au médium que tu utilises :glycérine,glycérine gélatinée ou autre.

De plus, je ne dispose que d'un microscope au grossissement maximum x 1000 ; à ce grossissement-là, l'observation n'est pas aisée, l'oculaire est comme "brouillé"

Donc tu utilises l'objectif x100....est-ce que tu l'immerges dans l'huile?
Attention à ce que le médium utilisé ne se mélange pas à l'huile d'immersion!
Pour l'observation des pollen,j'utilise rarement l'obj.x100 et me limite le plus souvent au x40 ce qui donne un grossissement de x400 .

Si j'ai bien compris, il faudrait "nettoyer" plusieurs fois l'échantillon avec de l'alcool, avant d'appliquer le colorant ?

Oui, c'est bien cela:il faut dégraisser l'enveloppe externe des grains

Question plus pratique, j'ai des échantillons de pollen que les abeilles ont récolté vers la mi-décembre 2008(eh oui, malgré le froid). Auriez-vous des pistes de plantes qui seraient susceptibles de fleurir à cette saison ?

Cela dépend de la région où tu te trouves.D'autre part,les abeilles venaient-elles réellement d'amener ce pollen qu'en décembre : n'a-t-il pas pu être récolté plus tôt?

Chris, c'est bien cette clé!

[k-rowin]

Alors merci à Chris pour sa banque de pollen ^^

Et merci beaucoup à toi, André, pour tous tes éclaircissements ! J'avais pris l'habitude effectivement de n'utiliser que le grossissement x40, mais je ne pensais pas que c'était suffisant pour la détermination. Pas évident d'y voir des pores ou des sillons ! D'autant plus que parfois je me demande si ce ne sont pas des bulles d'air ?

En tout cas je vais appliquer tous ces conseils la prochaine fois en labo. Par contre je n'ai pas de gélatine. Et je ne comprends pas encore bien la différence entre certains termes (colpé ou colporé), du moins je ne vois pas la différence au microscope.
Mon plus gros problème réside dans le fait qu'ils se ressemblent tous !!! la plupart des pollens que j'ai observés sont ronds (parfois plus elliptiques), avec 3 pores (du moins c'est ce que je crois voir ^^), exine lisse... Comme le sont beaucoup de pollens...

Pour le pollen, oui oui les abeilles venaient bien de le récolter, pas de doute là-dessus (mon étude naturaliste consiste justement à vérifier ces apports pendant la phase hivernale, j'ai eu beaucoup de mal à trouver un apiculteur qui accepte de poser des trappes, résultat les abeilles sortent dès que le soleil réchauffe suffisamment la ruche !! même s'il ne fait que 8 ou 9 degrés dehors !!!!) Pour info j'habite en Vendée, et du pollen a été récolté du 6 au 9 puis du 19 au 23 décembre environ.

[André]

Bonjour Rowin
C'est vrai qu'il y a en hiver, par temps clément, toujours l'une ou l'autre fleur qui arrive à ouvrir sa corolle:campanule rotundifolia,trèfle,erophila verna,veronica persica,potentille,vesce.....

Aperture colporé: le pore s'inscrit dans le colpus: exemple:
http://www.lenaturaliste.net/forum/view ... 150&t=1385

Aperture colpé: un colpus simple:Exemple:
http://www.lenaturaliste.net/forum/view ... 150&t=1602

[k-rowin]

Bonjour,

Je souhaite vous poser une question a priori assez précise puisque je ne trouve la réponse nulle part : savez-vous combien il y a de cellules de pollen dans une pelote d'abeille ? (ou dans le pollen d'une fleur ?). Ou bien connaissez-vous tout au moins le poids d'une seule cellule ? Merci d'avance pour ce renseignement !

[André]

Bonjour Rowin

Il est très difficile de donner une réponse simple à ces questions!
Le nombre de grains de pollen dans une fleur dépend du nombre et de la grandeur des étamines... il dépend donc de l'espèce considérée!
Quant au poids d'un grain,il est théoriquement facile de l'évaluer,car on peut considérer que sa masse volumique est un peu inférieure à celle de l'eau.
Par contre, une fois de plus il faut savoir de quelle espèce il s'agit: un grain de Myosotis qui fait aux alentours de 5 µm n'aura pas le poids d'un grain de pollen de géranium qui fait plus de 100µm de diamètre!