Le Naturaliste

=> Déplacé de http://www.lenaturaliste.net/forum/view ... 183&t=2122


Et une recette de Carmin aluné de Grenacher tirée du Précis de Microscopie de Langeron (1921):
C'est celle que j'utilisais...
Sans alcool bien sur, ET en 2 bains séparés.
J'avais pas pensé à regardé le Langeron, plutot orienté histo animale.

ps Alain: Je serais intéressé de voir une image de tes anciennes lames montées au baume.
Photos bientot, je remets en service un oculaire numérique.
J'ai pris 5 minutes pour regarder un peu mieux le stock de lames (presque 40 ans...); bilan:
- les lames montées à l'Eukitt semblent bien mieux conservées
- les lames montées au Baume sont globalement un peu passées, très pastellisées.
Exceptionellement, soit le carmin a en parti disparu, soit le vert a en parti disparu.
J'avoue qu'il arrivait que le protocole ne soit pas respecté à la lettre, pas de pendule murale, pas de troteuse à nos montres, pas de chronos Oméga ...

On est loin, je confesse, des résultats que des protocoles actuels permettent d'envisager :
différenciation en 3 bains (Acridine Red, Acriflavine et Astra Blue), réactif mis au point par Robin Wacker.
Note: découvert sous le web, jamais pratiqué, Wacker inconnu, Klaus semble connaitre, à toi le relai !! Photo de Rolf-Dieter Müller
Un protocole très détaillé fut publié en langue allemande...

stained with Acridine Red, Acriflavine and Astra Blue, from Robin Wacker

Klaus bonsoir, je crois que tu connais bien, non ?
Peux-tu nous donner plus de précisions sur le réactif ???
merci

Bonsoir Alain, tous,

je viens d´avoir écrit une longue article, en passant j´ai cherché le lien:
http://www.mikroskopie-forum.de/read.php?2,51090
revenue au "naturaliste" et tout perdu
encore une fois mais plus bref

Je connais tous les deux Robin et Rolf-Dieter. J´ai vu Robin samedi passé à l´université de Würzburg.
Il-y-a un meeting des microscopistes 2fois par an.
La colo W3 de Robin était un secret plus que 20 ans je pense. Mais il a fait un artricle dans le Microkosmos 4/2006
Le protocole est difficile il demande TEP (Triethylphosphat) pour la déseccage avant l´isopropanole, parce que des traces de l´eau vont extracter l´acridine-rouge.

Rolf-Dieter a fait des essays d´éleminer le TEP (très cher!) avec des bons résultats.

Rolf-Dieter m´a dit qu´il préfère mon Etzold-vert, parce que l´usage est plus simple et les résultats sont aussi bon (mais pas si spectaculaire que Robins W3) Il a acheté 250 ml!

Dans le lien il-y-a un autre lien où R-D donne les détails (André pourrait traduire? )

les colos

Acridine Red, Acriflavine and Astra Blue

sont de Chroma . Mais je pense, ce n´est pas possible d´acheter l´acriflavine. Il-y-a des réstrictions. Si quelqun est interessé on peut s´adresser à moi!

Ouff le Français

Le protocole publié est le suivant :
W-3A-Färbung nach Wacker (Acridinrot-Acriflavin-Astrablau)

Benötigte Chemikalien :
Acridinrot 3B (C.I. 45000),
Acriflavin (C.I. 46000),
Astrablau FM (C.I. 48048),
Ethanol 50%ig,
Eisessig,
Triethylphosphat (TEP),
Xylol

Bemerkung :
Nach Mitteilung von Herrn Dr. Horst Wörmann und mit freundlicher Genehmigung von Herrn Robin J.G. Wacker

Arbeitsablauf :
1- Schnitte in Xylol entparaffinieren (dann Alkoholreihe bis zum 50%igen Ethanol)
2- Acridinrotlösung 5 - 15 Min.
3- Auswaschen mit Aqua dest. 15 Sek.
4- Acriflavinlösung 5 - 15 Sek.
5- Auswaschen mit Aqua dest. 15 Sek.
6- Astrablaulösung 30 Sek. - 3 Min.
7- Auswaschen mit Aqua dest. bis keine Farbstoffreste auf dem Objektträger verbleiben.
8- Auf dem Objektträger haftende Wassertropfen abschütteln.
9- Dehydrieren mit 3 Portionen Triethylphosphat (TEP) je 5 Sek.
10- Aufhellen mit Xylol (2-3 Portionen) Mikroskopische Kontrolle.
11- Falls die Färbung nicht zufriedenstellend gelungen ist -> das Xylol mittels Ethanolreihe (bis 50%ig) entfernen. NACHFÄRBEN siehe Anmerkung.
12- Einschluß in nicht fluoreszierendes synthetisches Eindeckmittel (z.b. Malinol, Eukitt, Entellan)

Ergebnis :
Zellwände blaugrün bis grün, verholzte Zellwände leuchtend rot. Zellwände der äußeren Hypodermis orangerot
Zellwände der innenliegenden Hypodermis tiefrot, Suberin und Cutin hellrosa, Zellkerne tiefrot

Anmerkung :
Ist die Rotfärbung zu schwach ausgefallen, muss die Färbezeit mit Acriflavin verkürzt oder bei Nachfärbung die Einwirkzeit von Acridinrot verlängert werden.
Ist die Blau-Grün-Färbung zu schwach ausgefallen, die Färbezeit mit Astrablau verlängern.

Brilliantere Färbungen resultieren, wenn man die Astrablaulösung vor der Färbung mit einer kleinen Menge Acriflavinlösung versetzt.

Ansätze :
- Astrablaulösung: 2g Astrablau werden in 100ml Aqua dest. gelöst und mit 2ml Eisessig versetzt.
- Acridinrotlösung: 1g Acridinrot 3B werden in 100ml 50%igem Ethanol gelöst und mit 2ml Eisessig versetzt. Alternativ kann auch eine 1%ige wässrige Lösung von Acridinrot verwendet werden. Besser ist jedoch der angesäuerte alkoholische Ansatz.
- Acriflavinlösung: 1g Acriflavin werden in 100ml Aqua dest gelöst und mit 2ml Eisessig versetzt.

Je veux bien comprendre que l'Etzold soit plus simple...

Bonsoir Alain, tous,

Je veux bien comprendre que l'Etzold soit plus simple...

Mois je sais, parce que j´ai fait l´Etzold en toutes les variantes environs 500 coupes. Et Robins W3 plusieures fois.

Si on est interessé: à tester!