Le Naturaliste

Bonjour à tous

ayant découvert ici le merveilleux travail de Bernard et celui-ci ayant exposé sa méthodologie au détour d'un message, j'ai contacté Klaus qui m'a aimablement fourni du bleu et du vert Etzold.

Pour ce premier essai j'ai suivi strictement la méthodologie exposée avec le vert Etzold, bien que Klaus m'ait prévenu qu'il n'était pas content du résultat de sa dernière préparation (il me l'a fourni gratuitement !). Effectivement les couleurs ont mal pris et sur la dizaine de coupes de feuilles effectuées, seule une d'entre elles était à peu près colorée.


Cette première photo montre bien ce problème de coloration inégale. Cependant les poils que je voulais observer son bien mis en évidence : Sur celle-ci, on voit bien l'embase d'un poil : J'ai aussi observé plusieurs de ces curieuses structures :

Pour mon second essai, j'ai pris comme sujet l'Aphyllanthe de Montpellier, sujet traité par Bernard, afin de comprendre ce que je voyais au travers de ses explications, mais j'ai utilisé du Bleu Etzold.

J'ai préparé une dizaine de coupes et la coloration ce coup-ci a parfaitement pris. (pour info, le processus complet prend près d'une heure !) Je me demande que sont ces taches rouges au milieu des cellules bleues ??? Évidement, la comparaison ne laisse aucun doute : j'ai beaucoup de progrès à faire !

Mais je pense que les différences sont essentiellement dues à la finesse des coupes.

Pour mieux comprendre j'ai acheté (d'occasion) le livre de Pizon (Biologie, anatomie et physiologie végétales) recommandé par Alain Maraussan et un autre de Speranza et Calzoni recommandé par Yvesso Atlas de la structure des plantes (guide de l'anatomie microscopique des plantes vasculaires en 285 photos).

J'ai aussi observé plusieurs de ces curieuses structures...
Les vaisseaux conducteurs annelés spiralés.

Je me demande que sont ces taches rouges au milieu des cellules bleues ???
A priori, les noyaux cellulaires.
Ce qui pourrait faire penser que l'étape Eau de Javel fût oubliée pour cette préparation.
Avec un excellent avantage comme on peut le voir (le plus grand étant de supprimer les traces de chlore qui interfèrent avec le processus de coloration).

Mais je pense que les différences sont essentiellement dues à la finesse des coupes.
Oui.
L'idéal étant de se rapprocher de l'épaisseur des coupes effectuées au microtome après inclusion au Paraplast, soit 5 à 10 microns.
Tente de te fournir un excellent microtome manuel avec un pas de vis lent, et du sureau.
A noter qu'une fixation préalable des tissus végétaux à l'AFA (Alcool-Formol-Acétique) favorise la consolidation des tissus, supprime l'autolyse, et améliore les discriminations des réactions colorimétriques.

Pour mieux comprendre j'ai acheté (d'occasion) le livre de Pizon (Biologie, anatomie et physiologie végétales) recommandé par Alain Maraussan
Solution économique, mais sans oublier qu'il date des années 1930, on reste loin d'une bible moderne (coûteuse), avec une histologie complétée en microscopie électronique par transmission.

Merci Alain de tes réponses

Maraussan a écrit :
Je me demande que sont ces taches rouges au milieu des cellules bleues ???
A priori, les noyaux cellulaires.
Ce qui pourrait faire penser que l'étape Eau de Javel fût oubliée pour cette préparation.
Avec un excellent avantage comme on peut le voir (le plus grand étant de supprimer les traces de chlore qui interfèrent avec le processus de coloration).

Non l'étape Javel ne fut pas oubliée, 10 mn... mais l'épaisseur de la coupe aurait surement dû nécessiter un bain plus long !