Re: Histologie Végétale et Inclusion en Paraffine ?
Posté : 20 févr. 2009 13:02
En quelques mots l'essentiel du texte de Gerlach
Gerlach prévenit que la méthode de l'imprégnation par le PEG a des avantages mais aussi des inconvénients.
Un avantage important c'est qu'aucun déshydratation avec des alcools ou autre traitement avec des solvants de matière grasse est nécessaire, c'est pourquoi les Lipides dans les cellules maintiennent. Mais, comme l'imprégnation à la paraffine, le PEG neccesite l'effet de la chaleur, alors les rétractions des tissues ne peuvent pas toujours être évités.
Il remarque que, bien que le « Polyglycoleinbettung » apparaisse très simple, il n'est quand même pas toujours facile de gagner un bloc bien sectionable. Souvent la masse d'imprégnation devient tellement fragile qu'il soit lourd de faire de bonnes coupes. La remédie c'est de mélanger le Polyglycol avec la glycérine. Il faut ce faire compte aussi du fait que le PEG ne peut pas pénétrer dans des tissues très dense et avec peu des espaces extra-cellulaire, p. ex. beaucoup des Parenchymes.
Pour l'instant, selon Gerlach, l'imprégnation dans le PEG n'est pas encore un méthode de routine et en tout cas, si on n'a pas d'experiece avec le PEG, Il faut mis en oeuvre quelques pré échantillons avant qu'on utilise le PEG pour des grandes quantités des échantillons.
Préparation du PEG selon Krauter
Ajoute 0,5ml de glycérine a 20 g de PEG 1500 et laise fondue dans un étuve. Le mélange est hygroscopique et doit être garder dans un flacon bien ferme.
Méthode
Les objets sont préférablement fixer dans un fixative aqueux et bien laver dans l'eau. Ils sont placer dans un verre rempli d'un dilution à 20% du PEG selon Krauter. On prépare ce dilution dans un étuve en ajoutant 4 parts d'eau sur 1 part du mélange PEG-glycerine. On marque l'hauteur du liquide le verre et on divise cette hauteur en 5 parts égaux. On place le tout dans un étuve à 60°C pendant 3-4 jours. Durant ce temps l'eau s'évapore. Les objets flotter initialement, mais au fur et à mesure qu'ils sont imprègne avec le mélange de PEG-glycerine, ils baisser dans le liquide. Quand le verre ne contient qu'un cinquième du volume original, on faits les blocs. On remplit les formes faites avec un peu du papier d'aluminium avec le PEG selon Krauter non dilue, on ajoute l'objet et. Puis le tout est mis dan un endroit fraîche, préférablement dans un réfrigérateur enfin de se solidifier. Vue la nature hygroscopique du PEG, on garde les blocs dans un bocal bien ferme.
Gerlach prévenit que la méthode de l'imprégnation par le PEG a des avantages mais aussi des inconvénients.
Un avantage important c'est qu'aucun déshydratation avec des alcools ou autre traitement avec des solvants de matière grasse est nécessaire, c'est pourquoi les Lipides dans les cellules maintiennent. Mais, comme l'imprégnation à la paraffine, le PEG neccesite l'effet de la chaleur, alors les rétractions des tissues ne peuvent pas toujours être évités.
Il remarque que, bien que le « Polyglycoleinbettung » apparaisse très simple, il n'est quand même pas toujours facile de gagner un bloc bien sectionable. Souvent la masse d'imprégnation devient tellement fragile qu'il soit lourd de faire de bonnes coupes. La remédie c'est de mélanger le Polyglycol avec la glycérine. Il faut ce faire compte aussi du fait que le PEG ne peut pas pénétrer dans des tissues très dense et avec peu des espaces extra-cellulaire, p. ex. beaucoup des Parenchymes.
Pour l'instant, selon Gerlach, l'imprégnation dans le PEG n'est pas encore un méthode de routine et en tout cas, si on n'a pas d'experiece avec le PEG, Il faut mis en oeuvre quelques pré échantillons avant qu'on utilise le PEG pour des grandes quantités des échantillons.
Préparation du PEG selon Krauter
Ajoute 0,5ml de glycérine a 20 g de PEG 1500 et laise fondue dans un étuve. Le mélange est hygroscopique et doit être garder dans un flacon bien ferme.
Méthode
Les objets sont préférablement fixer dans un fixative aqueux et bien laver dans l'eau. Ils sont placer dans un verre rempli d'un dilution à 20% du PEG selon Krauter. On prépare ce dilution dans un étuve en ajoutant 4 parts d'eau sur 1 part du mélange PEG-glycerine. On marque l'hauteur du liquide le verre et on divise cette hauteur en 5 parts égaux. On place le tout dans un étuve à 60°C pendant 3-4 jours. Durant ce temps l'eau s'évapore. Les objets flotter initialement, mais au fur et à mesure qu'ils sont imprègne avec le mélange de PEG-glycerine, ils baisser dans le liquide. Quand le verre ne contient qu'un cinquième du volume original, on faits les blocs. On remplit les formes faites avec un peu du papier d'aluminium avec le PEG selon Krauter non dilue, on ajoute l'objet et. Puis le tout est mis dan un endroit fraîche, préférablement dans un réfrigérateur enfin de se solidifier. Vue la nature hygroscopique du PEG, on garde les blocs dans un bocal bien ferme.
