Coloration histo végétale: gros problème! (Carmino-Vert)

[PierreBeaud]

Bonsoir, je cherche de l'aide: en confectionnant des coupes végétales je rencontre systématiquement un problème: mes coupes se décolorent lorsque je les repasse dans la série des alcools avant le toluène. Ce constat est valable pour le carmin aluné, la safranine; le vert d'iode résiste. Que faire, où est l'erreur? Ose-t-on laisser la coupe colorée sécher et l'inclure directement (j'utilise l'eukitt)?
Merci pour vos propositions.
Pierre

[Maraussan]

Soit pas laissé assez longtemps dans le colorant (m'enfin je pense que tu as du tester ça...), soit la préparation colorante est sans mordançage...
(Taux d'alun nul ou insuffisant)
D'ou viennent les colorants ?

[Klaus]

Bonsoir pierre,

après la coloration on lave les coupes bien colorées avec de l´eau destillée. Si l´eau de lavage n´est pas coloré, on enleve l´eau. Mais on laisse les coupes jamais secher!!
Maintenant il faut travailler vite: trois fois on lave les coupes avec du l´alcohole (La première fois de l´éthanole 96% et deux fois isopropanole 100%).
Si il-y-a des traces d´eau pendant la lavage alcoholique les colo rouges seront extractées. ça veut dire il faut aller vite du stade aquatique aux stade sans eau. Si on est en isopropanole 100% c´est fait! Après toluène ou xylène et baume de canada, entellan, malinol ou autres..

Si on prend euparal il ne faut pas prendre xylène ou toluène. Après l´isopropanole on va directement dans l´euparale. Mois je prefere ça!

Une example:

600_IMG_0001.jpg

[PierreBeaud]

Pour Maraussan: le carmin vient d'Allemagne (je n'ai plus le nom du producteur en tête) et la solution a été saturée d'alun à ébullition; difficile d'en diluer plus. Le temps de trempage dans le carmin a été testé entre 20 minutes et 24 heures. Je ne sais pas si le carmin est de qualité nulle; est-il possible qu'à l'état de poudre il perde son pouvoir de coloration avec le temps (bocal en verre brun, armoire pas éclairée...) ou alors c'est l'alun de potasse qui ne vaut pas un clou!


Pour Klaus: mon protocole indique de passer dans l'alcool 70°, 94° puis 100°. La diminution de couleur est très marquée après le premier passage dans l'alcool à 70°. Je vais tester ta recette.

Merci pour vos réponses. Vielen Dank für Ihre Anworten.

Pierre

[Maraussan]

C'est toi qui fabrique tes solutions colorantes si je comprends ??
J'ai pas les formules en tete, n'y a til pas une question de pH de la solution ??
AVANT coloration, tu passes par quel traitement de destruction des matieres cellulaires ? Soude ?? Chlore ??
Tu rinces et neutralises ??
Le truc doit etre gros comme un éléphant...

[Klaus]

Re Pierre,

j´ai une question: pourquoi tu prends le carmine? Qu´est-ce que tu veux colorer? Au lieu de safranine, je prefère le chrysoidine.

Le rouge de mon coupe c´est fuchsine et chrysoidine. Les résultats sont normalement bon.

Le carmin je connais seulement en forme de carmine-acide acetique pour la mitose en racines de l´oignons. Mais la colo n´est pas de longue durée.

[Maraussan]

Carmin aluné de Grenacher: doit comporter de l'acide phénique comme tampon... c'est le cas ?
1g de carmin, 5g d'alun, acide 0.5g, 100ml d'eau

2 bain de rincage après hypochlorite
un bain tanpon à l'acide acétique avant coloration (2 minutes) : tu fais ???

[Klaus]

Re Pierre,

mais l´alauncarmin de Grenacher c´est un colo pour la zoologie ne pas pour la botanique:


Mikroskopische Färbemethoden Zoologie
Alaunkarmin nach Grenacher
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Benötigte Chemikalien :
Kalialaun oder Ammoniumalaun, Karmin (Carmin rubrum optimum C.I.75470), Formaldehydlösung 37%ig.
Bemerkung :


Literatur :
MT68 §635


Arbeitsablauf :
Schnitte in Aqua dest. spülen.
Alaunkarmin 30 Min.-24 Std.
Abspülen in Aqua dest. bis keine Farbwolken mehr abgehen.
Entwässern, Intermedium, Einschluß.
Ergebnis :
scharfe reine Kernfärbung.

Ansätze :
Alaunkarmin: 3-5g Kali- oder Ammoniumalaun in 100ml Aqua dest. lösen, 2g Karmin zugeben und unter Rückflußkühlung 1 Std. lang kochen. Nach dem Erkalten filtrieren und 2ml Formaldehydlösg. zugeben.

[Maraussan]

mais l´alaun carmin de Grenacher c´est un colo pour la zoologie ne pas pour la botanique:
Ben non:
Carmin aluné - vert d'iode, après destruction des contenus cellulaires, est une coloration double appliquée exclusivement aux tissus végétaux. Les tissus cellulosiques sont différenciés en rouge, les tissus lignifiés sont différenciés en vert, et la cuticule et le suber (le liège) en brun...
Coloration différentielle en 2 bains (ou 2 réactifs), mais il faut un respect des pH relatifs.
En France, c'est vieux d'un siècle, et ça marche !!!

Note pour Klaus: c'est un protocole en 2 bains, qui peut etre combiné en un seul bain, c'est alors une technique connue sous le nom de "Carmino vert de Mirande".
Je préfère en 2 bains...

Savoir que le deuxième bain au vert d'iode peut etre remplacé par du bleu de methylène phéniqué.
Au lieu d'une coloration différentielle double vert-rouge, on aura une coloration différentielle double bleu-rouge.
Je n'ai jamais pratiqué avec ce bleu, mais cela doit marcher.

[Klaus]

Merci Alain,

je suis toujours un apprenti

Je ne trouve aucune mot dans ma literature.
Est ce que tu peux nous montrer une coupe colorée avec la méthode?