Je vous propose un protocole simple (durée totale 5 min environ) pour la coloration et l’observation des spores de russules. Facile à mettre en œuvre, c'est un bon moyen de faire découvrir la microscopie appliquée à la mycologie. Attention toutefois : ce protocole n’est a priori pas utilisable pour les mesures : en effet, celles-ci sont effectuées préférentiellement sur sporée afin d’éviter toute contamination par des spores immatures, ce qui n’est pas le cas ici. De plus, dans le cas des russules, les mesures sont traditionnellement données dans le réactif de Melzer lui-même, une solution peu convenable pour la microphotographie.
Préparation du matériel et coloration
Avec une pince, détacher par la base un morceau d’hyménium d’environ 2 ou 3 cm de longueur et le déposer délicatement sur une surface plane (par ex. une lame de coloration). Y déposer ensuite une goutte de réactif de Melzer et laisser agir pendant 30 secondes environ, puis enlever l’excédent de réactif avec du papier essuie-tout roulé en pointe (on évite ainsi de déposer sur les tissus des
poussières disgracieuses sous le microscope !)
Montage dans le chloral-lactophénol
Découper au scalpel la portion d’hyménium précédemment colorée et la diviser en petits carrés d’1 mm de côté environ. Disposer ces carrés sur une lame propre en les espaçant généreusement, puis déposer au centre une goutte de chloral-lactophénol et recouvrir d’une lamelle couvre-objet. À ce stade, il ne faut pas que le chloral occupe tout l’espace libre entre la lame porte-objet et la lamelle couvre-objet. Si c’est le cas, il y en a beaucoup trop et il faut en enlever avant de continuer. Dissocier ensuite les tissus et étaler le milieu de montage par percussions successives sur la lamelle couvre-objet au moyen d’un petit objet souple (par ex. en caoutchouc).
Observation
La préparation ainsi obtenue permet l’observation confortable des basidiospores et de leur ornementation, révélée par le réactif de Melzer. Il est également possible de mettre en évidence les apicules et la plage supra-apiculaire. L’observation de l’ornementation permet d’aborder la question de la profondeur de champ en microphotographie et l’intérêt des techniques d’empilement d’images.
Et pour finir : le PDF du protocole.
Cordialement,
Eddy