BX50 et diatomées, questionnement

Présentations, questions et débats sur les microscopes.
Règles du forum
Présentations, questions et débats sur les microscopes.

Re: BX50 et diatomées, questionnement

Messagede Maraussan » 14 Jan 2018 23:15

Bonsoir à tous,
2 précisions :
-0.17mm ne correspond pas à une épaisseur de lamelle, mais à l'épaisseur de milieu au devant du spécimen observé.
A moins d'utiliser un milieu de montage compressé et réticulable rapidement sous une source UV tel que pratiqué sous certains automates de montage en histologie, il reste du médium entre la lame et le spécimen. C'est l'explication de l'épaisseur de 0.15 à 0.16mm des lamelles calibrées. On arrive aux 0.17mm d'épaisseur de préparation très rapidement (voir bien plus si l'on veille pas au grain). Avec une optique courante, on visualise mal les différences de résolution, avec une optique pointue, l'effet est immédiat.
- attention aux pas de Z-Stack. Un déplacement mécanique de 1 micron sur l'axe Z d'un spécimen immergé dans un milieu d'indice 1.45 (les acryliques classiques par exemple) sera observé comme une hauteur de 1.45 microns. Il me semble en avoir déjà parlé, il y a longtemps.
Avatar de l’utilisateur
Maraussan
membre
membre
 
Messages: 4795
Inscription: 21 Jan 2008 18:35
Prénom: Alain2

Re: BX50 et diatomées, questionnement

Messagede michelflashman » 14 Jan 2018 23:30

Maraussan a écrit:Bonsoir à tous,

- attention aux pas de Z-Stack. Un déplacement mécanique de 1 micron sur l'axe Z d'un spécimen immergé dans un milieu d'indice 1.45 (les acryliques classiques par exemple) sera observé comme une hauteur de 1.45 microns. Il me semble en avoir déjà parlé, il y a longtemps.


Bonsoir,

cela signifie t il que les 1.9 µm de profondeur de champ de l'objectif seront un peu juste au niveau du recouvrement de stacking ?
La critique et la contradiction sont 2 éléments constructifs indispensable a la bonne vie d'un forum .
Il n'y a rien de pire que la blablatitude qui ne mène a rien . Je fais confiance aux membres du forum
Avatar de l’utilisateur
michelflashman
membre
membre
 
Messages: 1177
Inscription: 18 Sep 2013 09:29
Localisation: Nomade - Languedoc Roussillon
Prénom: Michel

Re: BX50 et diatomées, questionnement

Messagede André » 15 Jan 2018 08:33

Bonjour à tous, Alain
Lorsque tu dis :
-0.17mm ne correspond pas à une épaisseur de lamelle, mais à l'épaisseur de milieu au devant du spécimen observé.


Tu sous- entends bien que les 0.17 doivent correspondre à l'épaisseur du milieu plus l'épaisseur de la lamelle ?
C'est pour cela qu'il faut déposer les diatomées sur la lamelle et non sur la lame , non ?
Amicalement
André Advocat

Logiciels:Microcartouche outil indispensable développé par Christian Aubert,Photoshop,Neatimage,Helicon

Le Naturaliste...le forum le plus regardé dans les terriers!
Avatar de l’utilisateur
André
Coadmin
Coadmin
 
Messages: 11654
Inscription: 28 Aoû 2007 22:12
Localisation: Citoyen du monde-Europe

Re: BX50 et diatomées, questionnement

Messagede Jean-marc » 15 Jan 2018 10:27

Bonjour André,

C'est également ce que j'indique dans mon message précédent, la bague de correction permet de corriger l'épaisseur lamelle + milieu de montage entre l'objet et la surface externe de la lamelle. Voilà pourquoi il faut monter le diatomées sur la lamelle. Sinon on peut se retrouver avec des MAP impossibles ou des images de très mauvaises qualité.

JM
Microscope Leitz Aristoplan, DIC, contraste de phase, fond noir, Fluorescence
http://www.lenaturaliste.net/forum/viewtopic.php?f=57&t=5886&p=54275&hilit=aristoplan#p54275
Éclairage diasc et épisc LED 20W + Flash électronique embarqué dans le statif commandé par Canon 600D
https://www.facebook.com/microscopie44/
https://www.instagram.com/microscopie_44/
https://www.youtube.com/channel/UCJyBt2gNj-tLFIjlcZXfNow
Avatar de l’utilisateur
Jean-marc
membre
membre
 
Messages: 1260
Inscription: 19 Juin 2010 09:48
Localisation: Nantes
Prénom: jean-marc

Re: BX50 et diatomées, questionnement

Messagede Maraussan » 15 Jan 2018 11:44

André:
Tu sous- entends bien que les 0.17 doivent correspondre à l'épaisseur du milieu plus l'épaisseur de la lamelle ?
C'est pour cela qu'il faut déposer les diatomées sur la lamelle et non sur la lame , non ?


Oui, et il en a toujours été ainsi.
Les utilisateurs d'objectifs ultra-haute définition et très grande ouverture numérique (type UIS2 UPLSAPO 60x ou 100x immersion) sont obligés d'utiliser des lamelles calibrées, et il est sous-entendu que la coupe histologique est parfaitement en contact avec la lamelle (la préparation lame/lamelle est comprimée). Sinon, les avantages optiques sont balayés.
Seuls les objectifs incluant un dispositif mécanique à bague hélicoïdale permettant le déplacement d'un lot d'un des groupes optiques permet de s'affranchir de cette contrainte, mais :
- leur diamètre est plus important et cela gène la plupart du temps l'utilisateur
- ils ne sont pas étanche, les pots de labo au Coca peuvent leur être fatal, et les mains sales les bloquent (!)
- leur prix est encore plus élevé
- et pour chaque préparation, il faut titiller la bague dans un sens ou l'autre afin de savoir si il faut corriger ou non... et c'est pas particulièrement pratique pour un anatomo-pathologiste qui doit examiner des dizaines ou plus de lames à chaque session.

Donc, il est (il a été) plus simple d'utiliser des lamelles calibrées et de bien monter les préparations... qu'elles soient histologiques ou de diatomées.

Lamelles rondes Carl Roth 18mm, 0.17+0.005mm (Präzisions-Deckgläser).JPG
Exif et Meta MicroCartouche Lamelles rondes Carl Roth 18mm, 0.17+0.005mm (Präzisions-Deckgläser).JPG (145.74 Kio) Vu 4498 fois
Dernière édition par Maraussan le 15 Jan 2018 13:06, édité 1 fois.
Avatar de l’utilisateur
Maraussan
membre
membre
 
Messages: 4795
Inscription: 21 Jan 2008 18:35
Prénom: Alain2

Re: BX50 et diatomées, questionnement

Messagede michelflashman » 15 Jan 2018 12:36

Le lien sur ces fameuses lamelles de precision

Merci Maraussan !



https://www.carlroth.com/fr/fr/Mat%C3%A ... 0010023_fr

Utilisateur nomade (via mobile device) Image
Avatar de l’utilisateur
michelflashman
membre
membre
 
Messages: 1177
Inscription: 18 Sep 2013 09:29
Localisation: Nomade - Languedoc Roussillon
Prénom: Michel

Re: BX50 et diatomées, questionnement

Messagede michelflashman » 15 Jan 2018 12:55

André a écrit:
Tu sous- entends bien que les 0.17 doivent correspondre à l'épaisseur du milieu plus l'épaisseur de la lamelle ?
C'est pour cela qu'il faut déposer les diatomées sur la lamelle et non sur la lame , non ?


Oui, mais en diatomées vivante , il y a t il une autre solution pour deposer les sujets autrement que sur la lame ?

Utilisateur nomade (via mobile device) Image
Avatar de l’utilisateur
michelflashman
membre
membre
 
Messages: 1177
Inscription: 18 Sep 2013 09:29
Localisation: Nomade - Languedoc Roussillon
Prénom: Michel

Re: BX50 et diatomées, questionnement

Messagede Maraussan » 15 Jan 2018 13:17

Non...
Simplement, avant de poser une lamelle, il faut savoir trier la récolte sur la lame au 10x, c'est à dire enlever dans la mesure du possible toutes sources de sur-épaisseurs (débris minéraux, restes de carapace de micro-crustacés, paquets d'algues filamenteuses, voir certains spécimens vivant types vers ou gros rotifères. On doit faire un CHOIX entre les uns, ou les autres...). Les bons microscopistes du 19è étaient tous de bons micro-manipulateurs, et c'est toujours valide.
Micro-pipettes parfois et aiguilles montées constituent les premiers outils; on fait glisser les indésirables sur les cotés avant d'essuyer.
De toute manière, avec les objectifs APO à très grande ouverture, leurs très faibles WD (*) obligent à un tel exercice, sinon la lamelle se retrouve rapidement à une telle hauteur que l'on ne peut plus effectuer la mise au point.

Encore une fois, l'achat de ton UPLSAPO 40x à bague de correction d'épaisseur de préparation est un investissement exceptionnel.

(*) 0.13mm entre frontale et lamelle pour le 100x UPLSAPO, soit pratiquement deux fois moins qu'un 100x Fluor semi-Apo. Le rapport est le même pour les 40x et 60x...
Avatar de l’utilisateur
Maraussan
membre
membre
 
Messages: 4795
Inscription: 21 Jan 2008 18:35
Prénom: Alain2

Re: BX50 et diatomées, questionnement

Messagede michelflashman » 17 Jan 2018 19:12

Toujours dans l'apprentissage ! et recherche de résolution.

Un cymbella entre lame et lamelle avec Nafrax
objectif Olympus 40X UplanSapo 0.95 a sec
aucun stack.

P1010543nat.jpg
Exif et Meta MicroCartouche P1010543nat.jpg (110.38 Kio) Vu 4389 fois
La critique et la contradiction sont 2 éléments constructifs indispensable a la bonne vie d'un forum .
Il n'y a rien de pire que la blablatitude qui ne mène a rien . Je fais confiance aux membres du forum
Avatar de l’utilisateur
michelflashman
membre
membre
 
Messages: 1177
Inscription: 18 Sep 2013 09:29
Localisation: Nomade - Languedoc Roussillon
Prénom: Michel

Re: BX50 et diatomées, questionnement

Messagede André » 18 Jan 2018 17:55

Bonjour Michel
Vu le nombre de stries, de ponctuations et les terminaisons proximales du raphé en crochets,il s'agit très probablement de Cymbella lanceolata.
Amicalement
André Advocat

Logiciels:Microcartouche outil indispensable développé par Christian Aubert,Photoshop,Neatimage,Helicon

Le Naturaliste...le forum le plus regardé dans les terriers!
Avatar de l’utilisateur
André
Coadmin
Coadmin
 
Messages: 11654
Inscription: 28 Aoû 2007 22:12
Localisation: Citoyen du monde-Europe

PrécédenteSuivante

Retourner vers Microscopes

Qui est en ligne

Utilisateurs parcourant ce forum: Aucun utilisateur enregistré et 3 invités