Microscope pour comptage (cellule malassez)

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Re: Microscope pour comptage (cellule malassez)

Messagede Fredlab » 16 Mai 2017 15:05

Hello

Les metallo ne sont pas calculés pour traverser du verre.

S'il faut compter les levures (réduites à des points lumineux) au 10x, une longue distance de travail (le "L" ou encore "LWD"...) n'est pas nécessaire amha.
La planète peut pourvoir aux besoins de tous, mais non pas satisfaire la cupidité de certains (Gandhi)
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Re: Microscope pour comptage (cellule malassez)

Messagede sciroccoblow » 16 Mai 2017 16:16

Non, aucun soucis au 10X
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Re: Microscope pour comptage (cellule malassez)

Messagede Bernard-J » 16 Mai 2017 16:22

Bonjour,
Comme il y a à boire et à manger dans toutes ces réponses, je me permet d'amener mon expérience et mon sandwich :mrgreen:

Globalement le rendu n'est pas génial, il me permet d'observer mes cellules mais absolument pas d'effectuer un comptage à l'aide de ma cellule de malassez..

Si tu peux observer les cellules entre lame et lamelle mais pas les compter avec l'hémacytomètre Malassez, c'est effectivement que la Malassez est trop épaisse (200 um)pour ton objectif. Fermer le diaphragme d'ouverture aidera bien sûr, mais il faut utiliser une Neubauer ou Thoma qui ont une épaisseur de 100 um. Cent microns de gagné, c'est gigantesque !

pouvoir effectuer un comptage avec ma cellule. (Le bonus serait de pouvoir éventuellement effectuer une analyse morphologique des cellules

Pour le comptage, un microscope simple devrait suffire. Pour une analyse morphologique, évidemment non, mais qu'est-ce qu'une analyse morphologique? Si c'est pour distinguer les asques, ascospores et zygotes, un meilleur microscope est nécessaire, mais le contraste interférentiel ne l'est pas.

Objectif 10, 20 ou 40x ? longue distance ?

J'ai toujours utilisé des objectifs standards 0.17 biol sans problème. Le 10x est en général utilisé pour localiser les carrés à observer et l'on passe au 20 ou 40x pour compter. Bien sûr, l'agrandissement va dépendre du tube et du capteur de la caméra.

..pour la petite histoire généralement le microscope avait une platine à commande à gauche pour pouvoir utiliser le compteur à la main droite.

Merci ! Je me suis toujours demandé pourquoi certains MO m'énervaient avec leur commande platine à gauche,.. je pensais que c'était pour les gauchers.

Compteurs manuels

Ce sont des pièces de musée ou qui passent régulièrement à la benne ! La méthode que j'ai pratiquée le plus récemment est d'enregistrer des courtes séquences vidéos en scannant les carrés. Cela permet ensuite facilement de stopper sur les images de chaque carrés successifs pour le comptage après impression ou directement à l'écran avec un petit software.

Nous avions déjà eu une discussion sur le comptage des levures ici
http://www.lenaturaliste.net/forum/viewtopic.php?p=94938#p94938
Je conseillerais toujours vivement les hemacytomètres avec lignes claires - plus chers - mais oh combien plus comfortables pour les yeux.
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Re: Microscope pour comptage (cellule malassez)

Messagede kenypixel » 17 Mai 2017 09:57

Merci à tous pour vos retours, en particulier à Bernard pour sa synthèse. Il est vrai que que je n'ai pas vraiment de connaissances du coup je suis un peu perdu..

Si je comprends bien, j'ai besoin d'un objectif x40 standard 0.17 pas forcement long du moment que j'utilise une cellule de Neubauer.
Un leitz SM-LUX suffirait il ?
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Re: Microscope pour comptage (cellule malassez)

Messagede Bernard-J » 17 Mai 2017 10:39

Je ne connais pas le Leitz SM-Lux, mais en cherchant "Leitz SM-lux hemacytometer" sur google, je trouve des publis scientifiques qui mentionnent des comptages avec cette combinaison dans leurs materials and methods.
Celle-ci https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC359532/pdf/molcellb00016-0145.pdf mentionne même l'objectif utilisé (40x). Mais il n'est pas précisé s'il s'agit d'un 0.17, probablement parce que les labos de biol à 99% n'en connaissent pas d'autres.
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Re: Microscope pour comptage (cellule malassez)

Messagede speculoos » 17 Mai 2017 10:46

je vous rappelle au passage que les lamelles des cellules de comptage sont nettement plus épaisses et rigides que les lamelles de 0,17.
ceci pour éviter l'effet bombé ou creux et fausser le comptage.
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Re: Microscope pour comptage (cellule malassez)

Messagede Maraussan » 17 Mai 2017 10:54

Bonjour à tous,
C'est un fait que devraient être utilisées des lamelles normalisées de 0.4/0.5mm d'épaisseur (à la place des classiques 0.13 à 0.17mm). Mais cela me semble bien superflu dans un cadre amateur de comptage de levures... sauf quant à vouloir respecter à la lettre le protocole (et est-il respecté par les professionnels ?!).
Ces lamelles sont difficiles à trouver pour l'amateur (et chères...).
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Re: Microscope pour comptage (cellule malassez)

Messagede Bernard-J » 17 Mai 2017 12:08

Les hemacytomètres sont livrés avec 1-2 lamelles idoines effectivement plus épaisses que les conventionnelles. J'ai toujours utilisé ces lamelles adaptées avec des objos 0.17.
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