Lames porte-objets hydrophiles et hydrophobes

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Re: Lames porte-objets hydrophiles et hydrophobes

Messagede Maraussan » 05 Juil 2016 15:19

Nous avons des soucis pour recouvrir nos lamelles de poly-lysine. Elles restent hydrophobes après une incubation d'une nuit en éthanol + HCl.

Bonjour,
étonnant avec des lames neuves, d'où viennent vos lames ? Trainent-elles à l'air libre ? Quelle localisation ? C'est le genre de problème fréquent à proximité d'un couloir d'industries chimiques.
Le bain d'alcool acétifié (en cristallisoir couvert) n'est utilisé qu'afin d’empêcher une contamination des lames par un film gras atmosphérique, et polariser la surface. Mais il ne nettoie pas.

J'aimerais tester votre méthode au NaOH. Quelle concentration utilisez-vous, s'il vous plait ?
C'est à la base un protocole très ancien (les années 1900) destiné à stériliser, décrouter et nettoyer progressivement à chaud des lames de récupération. Oui, on récupérait les lames, parfois par bains de milliers de lames. Une bassine d'eau, et une bonne louche de cristaux de soude, un bruleur à gaz dessous, vogue la galère le tout la fenêtre ouverte. Personne ne parlait en mole ou millimole. C'est donc un protocole dangereux, lunettes de protection et blouse... et on finissait toujours par se couper les doigts.

En 2016, cela me semble inconcevable dans un labo moderne.
Surtout sans connaitre l'origine du film hydrophobe, et sa composition.
Avez-vous tenté d'utiliser un solvant dégraissant du type acétone ou trichlorurethylène ?
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Re: Lames porte-objets hydrophiles et hydrophobes

Messagede Bernard-J » 05 Juil 2016 16:50

Bonjour Nadège et bienvenue,

La concentration que j'avais utilisée était au pif, disons env. 10 pastilles de NaOH dans 50 ml d'eau. Mais ces conditions ne sont pas relevantes pour votre problème - qui est d'ailleurs un souci dans de nombreux labos.
Je donne raison à Alain en ce qui concerne la pollution grasse atmosphérique et les grandes différences entre vieux/neufs paquets de lamelles et fabricants. Le résultat obtenu avec des traitements simples alcool-acide sera donc très variable selon l'origine des lamelles. Même l'autoclavage peut polluer ce matériel, surtout si l'autoclave est aussi utilisée pour les déchets.
Ceci dit, le traitement des lamelles pour le coating avec poly-lysine n'a rien à voir avec un nettoyage pour recyclage du matériel et doit être spécifique.
Le plus souvent effectué à l'acide, par ex. dans HCl 1M pendant des heures à 50 degrés et avec des étapes de sonication.
Voir http://www.agarscientific.net/helping-cells-and-sections-to-stick-cleaning-sterilising-and-coating-slides-and-coverslips/
D'autres utilisent la voie alcaline avec 10% de NaOH dans de l'éthanol.
http://bitesizebio.com/13460/how-to-fix-adherent-cells-for-microscopy-and-imaging/
Je ne sais pas quelle voie est la meilleure, mais un traitement trop intense avec NaOH peut attaquer le verre et opacifier la lamelle.
Si la voie alcaline (et assez dangereuse!) vous séduit, googlez "cleaning coverslips with naoh for polylysin"
Bonne chance!
Amicalement - Bernard
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Re: Lames porte-objets hydrophiles et hydrophobes

Messagede Nadège » 06 Juil 2016 10:35

Bonjour,
Je vous remercie vraiment pour toutes ces informations, je vais tester tout ça (enfin peut-être pas l'option la plus dangereuse !) et on verra bien ce que ça donne !
Je suis bien contente d'être tombée sur ce forum ;)
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