Choix microscope occasion observation levures bière

[pascal35]

Bonjour,
je suis un brasseur amateur et je cultive mes levures pour brasser de ma bière.
Pour la faire, je fais une culture de levures durant quelques jours afin de l’ensemencer avec une quantité suffisante de levures pour que l'activité fermentaire commence le plus vite possible.
Jusqu'à présent je détermine le nombre de levures viables de mes cultures en les cultivant sur boite à pétri après les avoir diluées en cascade. Le problème est qu'il faut attendre 48h pour avoir un résultat et donc parfois j’ensemence avec trop peu de levures. J'aimerais donc pouvoir déterminer leur nombre et leurs viabilité directement en les observant au microscope.

Je souhaiterais faire l'acquisition d'un microscope pour pouvoir estimer le nombre de levures et le pourcentage de lavures mortes et vivantes. J'ai déjà manipulé des microscopes quand je bossais en labo mais je m'y connais pas beaucoup. Apparemment, malgrès le prix, le contraste de phase pourrait être intéressant notamment pour identifier d'éventuelles contamination microbienne dans la bière ou les cultures de levures. J'aimerais donc acheter un microscope d'occasion de bonne qualité, me permettant déjà de dénombrer les levures par coloration. Par la suite j'aimerais pouvoir faire évoluer ce microscope avec par exemple le contraste de phase ou le contraste interférentiel. J'ai un budget d'environ 300-400€. Pourriez-vous me conseiller sur les modèles à rechercher ?

Que pensez-vous de ces annonces ? :

Microscope Leitz Wetzlar Laborlux 11 + metallograp : 300€
http://www.leboncoin.fr/materiel_medica ... htm?ca=6_s

leica hm-lux : 290€
http://www.leboncoin.fr/materiel_medica ... htm?ca=6_s

Zeiss : 300€
http://www.leboncoin.fr/materiel_medica ... htm?ca=6_s

nikon alphaphot 2 : 200€
http://www.leboncoin.fr/sports_hobbies/ ... htm?ca=6_s

Merci bcp !

Pascal

[Vardar]

Bonjour Pierre !

En tant que brasseur amateur et amateur microscopiste je lis ton message avec intérêt !
Où es tu situé ? (dans le Nord ou l'Est ?)
A priori le dernier microscope est la meilleure affaire (voire une bonne affaire). Les autres sont inadapté (le premier, fait pour observer les métaux) ou trop chers.
La contraste de phase n'aidera pas beaucoup pour identifier les contaminations; il faudra faire quelques colorations qui te permettront de déterminer quelles levures sont en vie et s'il y a d'autres choses.

[Fredlab]

Hello

Je ne dirais pas comme Vardar.
Le Laborlux 11 est un bon microscope et lui ajouter un condenseur pour contraste de phase est assez aisé (trouver ce genre de chose sur ebay est envisageable). Il n'est pas métallographique, le dispositif d'épi-illumination doit comporter une ampoule HBO (à vapeur de mercure - très chère - il faudra rajouter une alim, très spécifique...) pour faire de la "fluo" (reste à voir si ce genre d'éclairage est utile en microbio).
Il me semble que c'est celui-ci qu'il faut cibler en premier, en demandant tout de même si l'éclairage qui est dans le socle, fonctionne encore et s'il y a un condenseur sous la platine.

Après, en évolutif, il y a le Zeiss. Là encore, on trouve des condo CP assez facilement. Par contre, le bémol, c'est que les objectifs Zeiss de cette époque, peuvent souffrir de délamination (décollement entre les lentilles -> objectifs plus ou moins HS)

Nikon fait de très bonnes optiques, mais le statif sera moins précis que le Leitz (le top) et ça sera le moins évolutif (il me semble n'avoir jamais vu de condo CP à vendre séparément pour ce type de microscope)

Le Leitz HM-LUX est trop cher pour un microscope de la génération avant le Laborlux. La tourelle manque aussi d'homogénéité.

[speculoos]

Bonjour,

réponse lapidaire ,bien que je ne comprenne pas le coup des boites de petri, ou alors pour de trés petites quantités.

Si on part de levures lyophilisées, il est nécessaire de les hydrater, dans l'eau, avec agitation et oxygénation.
Normalement, avant d'inséminer les cuves, on passe par une étape intermédiaire de levurage, csd, on ajoute ces levures à un extrait de moût dans unfermentateur.
C'est à ce moment que l'on commence à suivre les levures qui doivent passer en reproduction (multiplication) quitte à complémenter en azote par exemple.

suivi

tout d'abord en coloration vitale, le bleu de méthylène n'est pas métabolisé par les levures morte ou en cours de bourgeonnage et de scission, ce peut prendre un certain temps, donc en montage humide (wet mount) . De toutes manières c'est le prélevement qui importe, et il ne faut pas taper dans la biomasse.
ensuite en comptage, normalement avec des cellules ( Thoma par expemple )le paramètre qui importe est la profondeur ( Tiefe ou depth), il faut que les levures ne soient pas en paquet sur des lames trop profondes ou que trop de cellules restent à la porte dans des lames trop minces.

on peut les colorer aussi au vert de malachite, de façon indifférenciée, mais la plupart des cellules bas de gamme produisent suffisamment d’aberrations au microscope pour les dénombrer.

Pour la morphologie, le CP n'est pas necessaire, les levures sont opaques, un fond noir est plus indiqué ( ou une coloration négative -- nigrosine ou encre de chine)

on peut aussi réaliser un étalement et observation au diode (lugol ou teinture d'iode) , les chitines sont mises en évidence.

La morphologie permet de faire la chasse à des intrus, ( pour certains comme les brettanomyces) mais c'est un peu la pêche à la truite.

pour l'analyse des moûts, une coloration de Gram d'un étalement est suffisante, les rincages et mordancage éliminent la plupart des levures.

bref pour ce genre d'activité il faut surtout de la vaisselle et un simple microscope biologique suffit.

Pour plus de précsions, il faudrait que je reprenne mes carnets d'il y a 30 ans.

[Vardar]

Hello

Je ne dirais pas comme Vardar.
Le Laborlux 11 est un bon microscope et lui ajouter un condenseur pour contraste de phase est assez aisé (trouver ce genre de chose sur ebay est envisageable). Il n'est pas métallographique, le dispositif d'épi-illumination doit comporter une ampoule HBO (à vapeur de mercure - très chère - il faudra rajouter une alim, très spécifique...) pour faire de la "fluo" (reste à voir si ce genre d'éclairage est utile en microbio).
Il me semble que c'est celui-ci qu'il faut cibler en premier, en demandant tout de même si l'éclairage qui est dans le socle, fonctionne encore et s'il y a un condenseur sous la platine.

Après, en évolutif, il y a le Zeiss. Là encore, on trouve des condo CP assez facilement. Par contre, le bémol, c'est que les objectifs Zeiss de cette époque, peuvent souffrir de délamination (décollement entre les lentilles -> objectifs plus ou moins HS)

Nikon fait de très bonnes optiques, mais le statif sera moins précis que le Leitz (le top) et ça sera le moins évolutif (il me semble n'avoir jamais vu de condo CP à vendre séparément pour ce type de microscope)

Le Leitz HM-LUX est trop cher pour un microscope de la génération avant le Laborlux. La tourelle manque aussi d'homogénéité.

Pour le Laborlux, tu as mieux vu, la fluo sera peu utile; reste à acheter une lampe normale. J'ai été trompé par le terme metallo... sans chercher plu loin. Le Zeiss est cher; il y en a de moins cher sur eBay. Le Nikon me paraissait plus récent.
Pour le CP je me rallie à Speculoos ça ne sert à rien

[pascal35]

Bonjour Pierre !

En tant que brasseur amateur et amateur microscopiste je lis ton message avec intérêt !
Où es tu situé ? (dans le Nord ou l'Est ?)

Bonjour Vardar,
Je ne suis ni dans le Nord ni dans l'Est, je suis en Bretagne !

[pascal35]

Bjr speculoos,
Voici quelques précisions sur le coup des boites de Pétri, j'ai différentes souches de levures que je conserve en stabs (des tubes avec du moût + agar). Quand je veux brasser, je prends des levures dans un tube et je les cultives durant 4 jours dans un incubateur avec table agitante, en ajoutant régulièrement du moût. J'ai une hotte à flux laminaire (car je suis aussi passionné par la culture in vitro de plantes...), toutes les manips sont donc réalisées en milieu stérile pour éviter de cultiver d'autres bébêtes que mes levures. Actuellement pour estimer la concentration en levures que j'obtiens, je prélève 1000µl de la culture que je dilue et j'étale 10µl de la dilution sur boite de Pétri. Je laisse les boîtes incuber et je compte le nombre de colonies qui se sont développées après 48h. Ça me permet d'estimer la concentration en levure vivantes que j'avais dans ma culture qui a servi à ensemencer ma bière.

[pascal35]

Sinon merci à tous pour vos conseils. Je vais donc abandonner l'idée du contraste de phase si ça n'a pas d'utilité pour identifier d'éventuels contaminants bactériens. Quel type d'éclairage me conseillez-vous ? Pour le fond noir il faut un condenseur et des objectifs spéciaux ?

[pascal35]

Hello

Je ne dirais pas comme Vardar.
Le Laborlux 11 est un bon microscope et lui ajouter un condenseur pour contraste de phase est assez aisé (trouver ce genre de chose sur ebay est envisageable). Il n'est pas métallographique, le dispositif d'épi-illumination doit comporter une ampoule HBO (à vapeur de mercure - très chère - il faudra rajouter une alim, très spécifique...) pour faire de la "fluo" (reste à voir si ce genre d'éclairage est utile en microbio).
Il me semble que c'est celui-ci qu'il faut cibler en premier, en demandant tout de même si l'éclairage qui est dans le socle, fonctionne encore et s'il y a un condenseur sous la platine.

Après, en évolutif, il y a le Zeiss. Là encore, on trouve des condo CP assez facilement. Par contre, le bémol, c'est que les objectifs Zeiss de cette époque, peuvent souffrir de délamination (décollement entre les lentilles -> objectifs plus ou moins HS)

Nikon fait de très bonnes optiques, mais le statif sera moins précis que le Leitz (le top) et ça sera le moins évolutif (il me semble n'avoir jamais vu de condo CP à vendre séparément pour ce type de microscope)

Le Leitz HM-LUX est trop cher pour un microscope de la génération avant le Laborlux. La tourelle manque aussi d'homogénéité.

Merci pour tes conseils Fredlab,
Si je ne cherche pas à rajouter le CP, penses-tu que le nikon pourrait convenir ? Est-ce que je pourrais rajouter le fond noir ? Quels autres accessoires, que je ne pourrais pas adapter dessus, pourraient être utiles ?

[speculoos]

Bonjour Pierre !

En tant que brasseur amateur et amateur microscopiste je lis ton message avec intérêt !
Où es tu situé ? (dans le Nord ou l'Est ?)

Bonjour Vardar,
Je ne suis ni dans le Nord ni dans l'Est, je suis en Bretagne !

Dans le courant du mois, je rentre en centre bretagne, si tu n'as pas peur des bonnets rouges, je peux ramener quelques cellules, j'ai aussi un SM_Lux sur place, tu peux faire des essais !