Histologie Végétale et Inclusion en Paraffine ? (+PEG)

[Yvan]

From J. E. Sass, "Elements of botanical microtechnique", 1940:

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[Yvan]

J’ai essayez de faire quelques blocs de PEG 1500 de Carl Roth avec des échantillons botanique pris en 08/2008 (feuille de poireau, tige et feuille de Cucurbito pepo) en utilisant la méthode de Gerlach (voire plus haute). Le procède a durée > 3jours.

Les résultats en quelques mots : aucun bloc(8)/(fragments des) coupe (des centaines) utilisable. Les blocs (15mm * 15mm * 5mm et 24mm * 24mm * 5mm) sont tous très friable et ils se pulvérisent très facile. Les échantillons sont mal pénètre et les blocs sont impossible a couper, ni au microtome Minot, ni au microtome a glissière, ni avec des lames jetables N/R/S 22/35, ni avec les couteaux en acier B, C , D, S17, ni avec les couteaux widia B, C , D.

Peut-être que sa marche mieux avec des pièces de taille modeste (24mm * 24mm est déjà considère comme «un objet assez grand » en microtomie).

Pour comparaison j’ai faits des blocs à la paraffine en utilisant un part des mêmes échantillons, suivant un protocole de routine :

AFA : dès 28/08/2009
Shandon 2LE, programme II
1. Alcool éthylique 50% : 4h
2. Alcool éthylique 70% : 4h
3. Alcool éthylique 95% : 4h
4. Alcool isopropylique I : 4h
5. Alcool isopropylique II : 4h
6. Alcool isopropylique/xylène (1/1) : 2h
7. Xylène I : 2h
8. Xylène II : 2h
9. Rotiplast I : 3h
10. Rotiplast II : 3h

Totale: 32h

Blocs de paraffine : Histocentre 2, Rotiplast 60°, moules acier, solidification –5°C.

Microtomie: Autocut (Minot), Feather N35 (lame jetable), inc. 5°, dec. 90°, RT : 15°C, epaisseur 6-15µm.
Feuille de poireau se coupe assez difficile (seulement +/- 30% des coupes à 8 µm utilisable) a cause de la nature de l’échantillon (zones relativement dur dans l’échantillon -> débris sur le tranchant du lame -> striations longitudinal…) . Tige et feuille de Cucurbito pepo se coupe sans problèmes a 5-7µm.

Etalement et collage des coupes : Lab-line (bain marie, 45°C) en utilisant : eau distillé fraîchement preparé: 2l, gelatine : 2gm, Agfa Agepon : 2ml. Aucun problème.

Séchage : étuve 45°C.

Coloration : je ne sais pas encore. Safranine – bleu astra ( ?) -> lundi ou mardi.

Feuille de poireau : beaucoup de débris, peu des coupes utilisable…:

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[fannechere]

Bonjour,
J'ai introduit l'usage du PEG dans le monde de la mycologie il y a plusieurs années (de mémoire, bien + de 20 ans).
A l'époque le PEG ne servait qu'à fabriquer des suppositoires et on ne le trouvait pas chez les revendeurs de réactifs pour mycologue. Il est, depuis, couramment employé en mycologie et disponible facilement.

A la suite, j'ai rédigé un article sur le sujet, qui a été diffusé sur le Web ("Micro Coupes à l'aide de Polyéthylène Glycol").
A noter que ma technique a bien évolué depuis, et un autre papier est prévu sur ce sujet.

Mon souci, à l'époque était d'effectuer des coupes minces dans des tremelles. J'ai utilisé du PEG 4000 ( qualité suppositoire, alors disponible en pharmacie), et je suis ainsi arrivé à couper en long quelques basides de mes tremelles...

Certains mycologues ont ensuite utilisé du PEG d'indice plus fort, donc plus dur.
Le PEG 4000 a une consistance identique à celle de la paraffine. Il est probable que les indices supérieurs soient plus "cassants". Il fond à faible température (voisine de celle de la paraffine).
J'utilise différents types de microtomes sans problème (à la main, type Ranvier, type "à rampe" ( cf article ), rotatif).
Précaution d'emploi : le PEG étant isolant, il faut attendre qu'il soit refroidi "à coeur" pour avoir une consistance convenable, généralement 5 à 10 minutes pour une coupe de champignon, selon épaisseur ( noter que le problème est exactement le même avec la paraffine).

N'étant pas botaniste, je n'ai jamais effectué de coupe sur autre chose que des champignons.
Les botanistes de ce forum pourraient utilement comparer leurs expériences selon le type de végétal.

NB : je ne touche aucune royaltie sur la vente du PEG !
PS : sur "http://mycolim.free.fr/sml/gener/logiciels1.html" vous trouverez divers logiciels gratuits qui pourraient vous être utiles. Outre la mycologie, plusieurs clés botaniques au format "cle" sont disponibles, mais cette collection ne demande qu'à être étoffée !

[Maraussan]

N'étant pas botaniste, je n'ai jamais effectué de coupe sur autre chose que des champignons.
Les botanistes de ce forum pourraient utilement comparer leurs expériences selon le type de végétal.

Bonsoir à tous,
merci pour ce rappel historique.
Pour ma part (cela n'engage donc que moi...), les tests effectués il y a une quinzaine d'années mettaient en évidence la difficulté extrême de pénétration du PEG en forme aqueuse au sein des tissus botaniques fixés. Si l'on compare bien évidemment aux imprégnations de paraffine/micro-cires précédées d'un bain de solvant utilisées en histo-botanique.
J'en suis resté là.
Cela ne semble pas avoir évolué, à voir...