L'inclusion à la paraffine reste toujours la methode de choix pour l'histologie animale mais aussi pour les tissus végétaux.
Les echantillons peu lignifiee sont coupez avec un microtome rotative, les objects lignifiee avec un microtome a glissière comme le Reichert-Jung Hn-40, mais les objects tres dur sont coupez avec des microtomes a glissieres tres lourd et solide comme le Leitz 1300, le Jung Tetrander ou le Jung Model K.
Ces microtomes ce vend de temps en temps sur Ebay a des prix plus ou moin modeste (L.1300: € 400 env., Petit Tetrander: €200 env. Pour le Model K on doit payer plus: € 800 - € 1000).
Si c'est neccesaire on peut congeler les blocs de parafine à -30°C avant/pendent qu'on fait des coupes. Pour cela moi j'utilise un vieux Leitz/Lauda Kryomat TKL-E.
Pour avoir un idee de ce genre de machinerie voir quelques pris de vue:
http://tinyurl.com/buyorf et
http://tinyurl.com/angxvs .
Quand on a qu'un microtome rotative et les echantillions sont tres lignifiee on peut faire l'inclusion à la paraffine en utilisant un autre alcool que l'alcool ethylique 90%-95% qui peut rendre les pieces extremement dur. Pour ce genre des echantillons on utilise le 2-etoxy-ethanol ("cellosolve") ou un des alcools butilique.
Protocol en general: inclusion à la paraffine, en utilisant l'alcool isopropylique comme dissolvant de la paraffine. Rien n'est plus facile.
- Des pieces de tissue, ne depassant pas 3-4mm sur leurs plus petite cote, fixez, lavez et dans l'eau
- alcool ethylique 50%: 4h
- alcool ethylique 70%: 4h
- alcool ethylique 90% - 95%: 4h
- alcool ethylique 90% - 95%: 4h
- alcool isopropylique absolu: 4h
- alcool isopropylique absolu: 4h
- alcool isopropylique absolu. Place le flacon bien ferme dans un etuve mis a la point de fusion de la paraffine. Ajouter de temps en temps des petites pieces de paraffine dans l'alcool isopropylique pour obtenir finalement une melange d'environ 1/1 d'alcool isopropylique/paraffine. Melanger de temps en temps: 4h
- Paraffine: 4h
- Paraffine: 4h
- Dernier bain de paraffine: 4h
Fait les blocs.
Les echantillons non ou peu lignifiee sont coupes avec un couteau B ou C ou en utilisant des lames jetables de 35°. N'utilise/n'achete pas les lames de 22°, celui-la sont pour la cryotomie seulement. Les blocs dur sont coupes avec un couteau D, preferablement un couteau Widia.
Les couteaux pour la microtomie se vend sur Ebay. Quelques marques moin connu, alors moin chere sont Dosch et Slee. Des couteaux nouveaux B et C pour la microtomie a des prix plus ou moin modeste: Euromex.
Moi je trouve l'inclusion à la paraffine beaucoup plus simple que l'impregnation avec le PEG et les blocs de paraffine gardent pour des annees, ce qui n'est pas les cas avec les blocs de PEG.