cf. Actinosphaerium, sujet de Yves

[Gérard-Breton]

Bonjour Yves, tous,

Superbe cet Héliozoaire ! Actinosphaerium me semble tout à fait plausible, pour être sûr il faudrait savoir s'il y a un ou plusieurs noyaux, et situé (s) où dans la cellule. Photos remarquables, et je suis très content de les voir... je n'avais jamais vu d'Héliozoaire !
Il faut dire que je pratique beaucoup moins l'eau douce que l'eau de mer ! Est ce qu'il y avait une vacuole pulsatile ?

Cordialement

Gérard Breton

[YVES50]

Bonsoir Gérard, tous

Je suis heureux de la chose :

je n'avais jamais vu d'Héliozoaire

Quels sont les colorants nucléaires qui peuvent pénétrer dans une telle masse de cytoplasme ? Faut-il au préalable fixer les bestiaux ?
Pour la vacuole pulsatile, comment la mettre en évidence ? Il semble que le rouge neutre ne les colore pas.
Me trompe-je ?
J'envisage une petite commande de quelques colorants et réactifs qui me font défaut.

[Maraussan]

Bonsoir,

Pour la vacuole pulsatile, comment la mettre en évidence ? Il semble que le rouge neutre ne les colore pas.
Me trompe-je ?

On ne colore pas la vacuole, il n'y a que de l'eau.
On l'observe comme si l'on y était au DIC, toujours la même rengaine...

Autre possibilité, la faire apparaitre "en négatif", c'est à dire incolore sur un fond cytoplasmique coloré foncé (coloration vitale).
Utiliser un objectif à grande ouverture numérique (*) afin d'effectuer une "coupe optique", un cytoplasme est rempli d'un tas de corpuscules empilés les uns sur les autres.

(*) un Plan Fluor à sec, ou idéalement un 60x PlanApo en immersion aqueuse si dispo.

[Gérard-Breton]

Bonsoir Yves, Alain, tous,

Pour les noyaux, effectivement, il faudrait une coloration nucléaire efficace sur une préparation temporaire, je ne suis pas sûr que cela existe, j'avais jadis utilisé le vert de méthyle.

Pour la vacuole pulsatile, sur une bête vivante, on la voir pulser sans coloration, et quelquefois (beau spectacle observé il y a longtemps, deux vacuoles pulsatiles pulsant en alternance (en opposition de phase comme disent les physiciens). C'était sur un cilié.

On parle de colorants vitaux de la vacuole comme le rouge neutre, mais je ne suis pas sûr qu'il colore les vacuoles pulsatiles.

Bonne soirée à tous.

Gérard Breton

[Maraussan]

On parle de colorants vitaux de la vacuole comme le rouge neutre, mais je ne suis pas sûr qu'il colore les vacuoles pulsatiles.

Bonsoir,
le rouge neutre peut colorer certaines vacuoles digestives, jamais les vacuoles pulsatiles.

Le rouge neutre est très peu toxique, mais l'intensité de coloration est faible.
Le bleu de crésyle brillant est mon préféré, l'intensité de coloration est puissante.

Le DIC Nomarski règle tous les problèmes, sans coloration...

[Bernard-J]

Juste !, les colorants vitaux vont éventuellement colorer les vacuoles digestives car les ciliés vont bouffer les particules de colorant comme des bactéries, mais jamais les vacuoles pulsatiles. Pour les vacuoles digestives, il y a toujours l'encre de chine dont les particules seront accumulées. C'est l'expérience faite avec les Paramécies et qui est souvent mentionnée dans les manuels.

Le vert de méthyle est parfait pour les noyaux. Il faut parfois passer la lame quelques secondes sur une flamme de briquet afin de faire mieux pénétrer le colorant.

Pour en revenir aux vacuoles pulsatiles et digestives, on peut les voir aussi correctement au contraste de phase (moins cher que le DIC):

vacuole PC.jpg (13.9 Kio) Vu 5415 fois

ou avec un fond noir en posant un disque de papier noir sur le condenseur (encore moins cher que le CP )

vacuole FN.jpg (21.87 Kio) Vu 5415 fois

ou probablement en éclairage oblique comme déjà mentionné.
Veuillez pardonner les photos misérables de Tetrahymena, elles sont postées uniquement comme preuve de faisabilité !

[YVES50]

Bonjour et merci pour vos conseils avisés.
Je vais me doter de bleu de crésyl brillant et de vert de méthyl (acétique).
Plus d'autres colorants dont le carmino-vert de Mirande et des lamelles 24x40. C'est le format idéal pour des recherches in-vivo.
J'ai débuté en photomicro avec des coupes histologiques végétales et souhaiterais m'y remettre.
C'était l'époque de l'argentique. Il ne fallait pas faire d'erreurs compte tenu du prix des pellicules.
ps. Je commande chez Marcel Lecomte.